24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2098  |  回复: 20
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

碧海行帆

金虫 (初入文坛)

[求助] 真菌转化子PCR验证问题

跟大家探讨一个问题,我做真菌的基因敲除,目前得到了24个转化子,进行PCR验证的时候,抗性基因也就是阳性对照成功扩出,要敲除的目的基因都没有扩出,按理说应该是都敲除了,但转化率达到了100%,大家说有这种可能吗???
回复此楼
硕士毕业去找工作
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 碧海行帆 at 2013-01-07 09:05:44
12.11.26(zhuanhuazi xiayou yanzheng-2).jpg(14.74KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4Dfbg2B3qUAQA2e6?p=130497
第一道为mark 第2道到第6道为5个转化子做下游验证,最亮的和我要的目的带大小类似,但杂带很多, ...

没有野生对照吗?这些杂带包括野生的带么?还有我怀疑你PCR时候的模板量太大,所以特异性不行。你用了多少DNA模板?
14楼2013-01-07 11:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
碧海行帆: 金币+1 2013-01-07 10:45:31
你用抗性做筛选标记,假的都死了,出来假的才不对吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-01-05 20:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
碧海行帆: 金币+4 2013-01-07 10:46:10
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 16:51:20
如果有抗性基因而要敲除的基因还在的话才有问题,那说明不能用抗性基因来筛选目的基因了。此外,我觉得你最好不要用PCR负结果来证明敲除基因不在了,应该用敲除基因序列两端的DNA序列做PCR,确定突变株的带(含抗性基因)位置和野生型不同,并且不含野生型的带。
3楼2013-01-06 02:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

碧海行帆

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-01-05 20:36:31
你用抗性做筛选标记,假的都死了,出来假的才不对吧。

嗯,但也有抗性基因转进去了,目的基因没转进去的情况啊
硕士毕业去找工作
4楼2013-01-06 11:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见