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bluesun5198

银虫 (小有名气)

[求助] AFLP选扩弥散,无很明显主带

做基因组DNA, AFLP引物筛选,第一张图是预扩增琼脂糖检测结果,第一排是我的预扩产物(下面是帮人带的样)60V 1h, 1%的胶,没注意显色剂Gelred和胶的比例,故跑的不是很好。(酶切连接产物没有稀释直接做的预扩)

后面两张都是同一块选扩的胶,一个是正常曝光,另一个是过曝光的,由于点样孔漏了,故只有前两排孔比较完整。3%的胶,70V 50分钟捡的,感觉选扩的引物没有一个能用的,不想上聚丙酰胺凝胶了,想直接跑荧光了。(选扩引物是师姐留下的,时间有点久,溶液-20大概放了1年了,不知道还能用不)

求高人指点,是我选扩体系的问题,还是引物的问题,还是说我的预扩出问题了。可以直接上荧光不?关键荧光引物贵啊。求指点啊

dell 2012-12-27 13hr 55min52(2) LY6 L1 L2 L24 L25 H21 H20.jpg



dell 2012-12-31 14hr 09min选扩1.jpg



dell 2012-12-31 14hr 13min过曝光.jpg

[ Last edited by bluesun5198 on 2013-1-3 at 23:00 ]
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bluesun5198

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-05 13:58:45
我都是选扩完直接跑聚丙烯酰胺的,预扩、选扩都不跑琼脂糖...

哦,谢谢,今天用重新做的预扩产物做的选扩,感觉效果好了些,有几个样品酶切产物应该有问题。我再继续试试,多谢指点
8楼2013-01-05 18:52:50
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bluesun5198: 金币+10, 有帮助 2013-01-04 15:52:29
建议还是跑聚丙烯酰胺凝胶电泳,我觉得引物没问题,就是带没跑开。另外,上样量,胶浓,电泳电压,时间都需要你自己摸索优化。

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2楼2013-01-04 09:33:35
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liugs

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

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3楼2013-01-04 11:21:17
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bluesun5198

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2013-01-04 09:33:35
建议还是跑聚丙烯酰胺凝胶电泳,我觉得引物没问题,就是带没跑开。另外,上样量,胶浓,电泳电压,时间都需要你自己摸索优化。

谢谢回复,我再摸索摸索,非常感谢
4楼2013-01-04 15:51:09
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