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bluesun5198银虫 (小有名气)
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[求助]
AFLP选扩弥散，无很明显主带
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做基因组DNA, AFLP引物筛选，第一张图是预扩增琼脂糖检测结果，第一排是我的预扩产物（下面是帮人带的样）60V 1h， 1%的胶，没注意显色剂Gelred和胶的比例，故跑的不是很好。（酶切连接产物没有稀释直接做的预扩） 后面两张都是同一块选扩的胶，一个是正常曝光，另一个是过曝光的，由于点样孔漏了，故只有前两排孔比较完整。3%的胶，70V 50分钟捡的，感觉选扩的引物没有一个能用的，不想上聚丙酰胺凝胶了，想直接跑荧光了。（选扩引物是师姐留下的，时间有点久，溶液-20大概放了1年了，不知道还能用不） 求高人指点，是我选扩体系的问题，还是引物的问题，还是说我的预扩出问题了。可以直接上荧光不？关键荧光引物贵啊。求指点啊  dell 2012-12-27 13hr 55min52(2) LY6 L1 L2 L24 L25 H21 H20.jpg  dell 2012-12-31 14hr 09min选扩1.jpg  dell 2012-12-31 14hr 13min过曝光.jpg [ Last edited by bluesun5198 on 2013-1-3 at 23:00 ] |
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zhangyonghu
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- 专业: 植物遗传学
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我现在是一点进展也没有啊 欲扩在750那有一条明显的主带，向下弥散到200 选扩点样孔那特别黑，在往下有点弥散 我的引物是新稀释的 你能把你的步骤、体系和程序发到我的邮箱么：zhangyonghu0815@126.com 谢谢 我看看，是不是我的操作过程有什么问题了 |
12楼2013-03-05 19:28:52
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
bluesun5198: 金币+10, ★有帮助 2013-01-04 15:52:29
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bluesun5198: 金币+10, ★有帮助 2013-01-04 15:52:29
| 建议还是跑聚丙烯酰胺凝胶电泳，我觉得引物没问题，就是带没跑开。另外，上样量，胶浓，电泳电压，时间都需要你自己摸索优化。 |
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bluesun51982楼2013-01-04 09:33:35
3楼2013-01-04 11:21:17
bluesun5198
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4楼2013-01-04 15:51:09
10