24小时热门版块排行榜    

查看: 3067  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] pET31b双酶切为何只有一条带呀???

各位大侠好,最近我用pET31b空质粒做Nde1和Xho1双酶切,两酶之间大约有380 bp,但为何双酶切后看不到380 bp的条带呢??两种酶没有问题,已经验证过单酶切都能切开,双酶切也能切开,大小是对的,但就是没有切下来的小片段,这是为何呀???
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ccharlien at 2012-12-29 22:44:34
你已经验证了双酶切大小是对的(小了380bp)但是看不到380bp的条带?
我猜测可能质粒浓度低片段小有可能胶成像系统的自动设置看不出来或者酶切时间太长了

酶切时间1小时,算长吗?
7楼2012-12-30 13:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

ccharlien

木虫 (正式写手)

你已经验证了双酶切大小是对的(小了380bp)但是看不到380bp的条带?
我猜测可能质粒浓度低片段小有可能胶成像系统的自动设置看不出来或者酶切时间太长了
2楼2012-12-29 22:44:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢,学习了 2012-12-30 13:07:47
其实应该是你没看见,条带亮度都是和质量成正比的,你切下来的380bp片度与你的质粒摩尔量是一样的,那么你能期待它有多亮啊(估计只有你质粒亮度的十几分之一)?我觉得仔细看还是有的,不过用成像系统估计是看不见的。做分子的眼睛都是练出来的,特别是一些先双酶切再胶回收的,经常看不清!
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
3楼2012-12-30 02:13:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cdmmore: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2012-12-30 13:09:30
缩短电泳时间,加大上样量应该可以看到吧。分子量小的片段亮度本身就比载体暗很多,电泳时间长一点后下面胶的EB浓度变小,更加不容易看清。
4楼2012-12-30 02:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
请填处理意见