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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大肠杆菌表达MBP标签蛋白为什么裂解后分解了？
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌表达MBP标签蛋白为什么裂解后分解了？

在大肠杆菌表达MBP标签融合蛋白，诱导后的菌体全蛋白是有的。
裂解后上清和沉淀都没有目的蛋白。
看条带有可能标签和自己的蛋白断开了。这种可能有多大？怎么解决？

希望各位能够帮我，谢谢！
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1楼 2012-12-27 13:37:12
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yeyu541200 at 2012-12-27 15:23:36
有这种可能，多大不好说，
你在裂解液中加蛋白酶抑制剂了么？
你是用的超声波裂解的么？超声波裂解 如果工作时间过长    也有可能会把目的蛋白弄断，或弄碎。

用的NOVAGEN的Bugbuster，裂解了1毫升菌液集下的菌。
这个挺温和的，不需要超声的。
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3楼2012-12-28 17:17:55
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yeyu541200

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有这种可能，多大不好说，
你在裂解液中加蛋白酶抑制剂了么？
你是用的超声波裂解的么？超声波裂解 如果工作时间过长    也有可能会把目的蛋白弄断，或弄碎。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-27 15:23:36
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