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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Tris-盐酸 缓冲试剂
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植化

木虫 (正式写手)

[求助] Tris-盐酸 缓冲试剂

酶活实验需要用 50mM pH7.5 的Tris-盐酸缓冲试剂，请问：我要怎么配置？

买了Amresco的Tris-Hcl，固体100克。我很纳闷为什么是Tris、盐酸混在一起的一种固体。不应该是Tris和盐酸分开的，先溶解Tris再用盐酸调pH吗？是不是我买错了

今天配了100ml 50mM 的，测得pH值是4.27。为啥不是7.5？

初做生物实验，请大虾们不吝赐教

[ 来自科研家族 快乐家族 ]
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1楼 2012-12-25 17:11:19
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植化

木虫 (正式写手)
2楼2012-12-25 17:24:32
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wmj840613

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-12-25 21:17:00
amisking: 金币+6, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-25 21:17:08
应该是分开配置储备液的，不然怎么调PH？
Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与40.3毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.14;
0. 1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严！
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每个人跑起来都是一部传奇。。。
3楼2012-12-25 17:46:35
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mguo15

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-12-25 21:17:15
TBS的配置是以Tris 计量的，你称tris 在pH计上用盐酸调即可。
买来的Tris 有 Tris base,和Tris-HCl 不同规格，这是厂家生产时，用HCl调过pH使其容易结晶，得到的产物就是 Tris-HCl！
TBS 的最佳pH范围是8。0，PBS 是7。0 ， 另一个好处是TBS 不如PBS易长霉！
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4楼2012-12-25 20:22:10
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植化

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wmj840613 at 2012-12-25 17:46:35
应该是分开配置储备液的，不然怎么调PH？
Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与40.3毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.14;
...

这个我知道，那可能是我买错试剂了
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5楼2012-12-25 21:46:13
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植化

木虫 (正式写手)
内容已删除
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6楼2012-12-26 09:16:21
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植化

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wmj840613 at 2012-12-25 17:46:35
应该是分开配置储备液的，不然怎么调PH？
Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与40.3毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.14;
...

我可以计算出50mM 100ml的Tris用量直接溶解再用盐酸调pH配置吗？还是必须要先配成0.1M的再稀释？？
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7楼2012-12-26 11:06:19
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果严格的话，则需要按照标准缓冲液的配方进行配制。如果不是特别严格的话，可以这么配，对一般实验无影响。另外，如果使用次数较多的话，可以配高浓度的然后稀释，PH没什么明显变化，而且保质期有几个月呢
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8楼2012-12-26 14:24:42
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loveangno

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

ph是需要用盐酸调节到7.5的  
需要注意的是  你用来调节ph的盐酸
最好浓度不要太小  否则你加的体积就会很大 我平时用的是体积比1；1的   
另外  比如你要配置500ml的tris   你最好先加450ml的溶剂  调节好ph后 最后定容至500ml
这样的话会准确一些
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植化
9楼2013-02-28 12:11:29
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植化

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by loveangno at 2013-02-28 12:11:29
ph是需要用盐酸调节到7.5的  
需要注意的是  你用来调节ph的盐酸
最好浓度不要太小  否则你加的体积就会很大 我平时用的是体积比1；1的   
另外  比如你要配置500ml的tris   你最好先加450ml的溶剂  调节好ph后 ...

谢谢
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10楼2013-02-28 15:02:06
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