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argon8436木虫 (小有名气)
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量子点标记的DNA电泳成像问题
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我们做了一个量子点标记DNA的实验，现在用琼脂糖凝胶电泳测一下DNA和量子点的滞孔浓度。图中上样孔从上到下的样品分别为倍比稀释的量子点TE溶液和一定浓度的DNA TE溶液，上面的量子点浓，下面的稀。用90V跑了20分钟。跑电泳时候观测到孔1-4均向负极跑，孔5看不出来。跑完后，胶在阳光下的图片和在凝胶成像仪上的图片如上图。 阳光下：孔1-4的溴酚蓝显示向正极跑，孔2-4的上样孔中还留有少量溴酚蓝，且贴在了负极一侧。孔5显示向负极跑。（跟电泳中观察到的不太一样） 凝胶成像：只有孔1的上样孔中有一点荧光。且观察到上样孔到负极的胶上有类似溴酚蓝的带。 请问：1、电泳中和电泳后的溴酚蓝跑的现象不一样，是为什么？ 2、凝胶成像下的类似溴酚蓝的带是什么？它和阳光下的图片显示的溴酚蓝的带为什么方向不一样？ 3、量子点在琼脂糖凝胶电泳后还会不会在紫外下发光？电泳会对量子点发光产生什么样的影响？ 4、量子点标记DNA后，对DNA和EB的结合有没有影响？ 5、除了孔1，别的孔都没有荧光，那么DNA跑哪儿去了？还是不能和EB结合？那在此情况下如何显色？  1324.png  123456.png |
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zhlf1989513
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argon8436: 金币+100, ★★★很有帮助, 确实很有启发,太感谢了! 2012-12-24 09:10:35
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1、电泳中和电泳后的溴酚蓝跑的现象不一样，是为什么？ 是一样的。不应该不一样。不过，要看你的量子点是否都是带负电荷的？是否重复实验都是这样的结果？ 2、凝胶成像下的类似溴酚蓝的带是什么？它和阳光下的图片显示的溴酚蓝的带为什么方向不一样？ 溴酚蓝的作用不过是指示你的胶大概跑得什么程度。从未有不一样的现象。 3、量子点在琼脂糖凝胶电泳后还会不会在紫外下发光？电泳会对量子点发光产生什么样的影响？ 量子点在紫外下是会发光的，电泳时去掉EB才会有荧光的。EB会淬灭荧光。 4、量子点标记DNA后，对DNA和EB的结合有没有影响？ 量子点指示作用，对于DNA没有什么影响，而且agarose千万不要EB才会有量子点的光的。 5、除了孔1，别的孔都没有荧光，那么DNA跑哪儿去了？还是不能和EB结合？那在此情况下如何显色？ 如果有荧光来自的只可能是本身的荧光蛋白和量子点，可以在你的量子点拍照后染色DNA，可以前后位置判断结合 |
2楼2012-12-23 16:07:28
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