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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA电泳凝胶成像系统条带很宽，都有哪些因素
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augusten

铁虫 (初入文坛)

[求助] DNA电泳凝胶成像系统条带很宽，都有哪些因素

平板电泳，1×TBE琼脂糖1.2%，有总DNA、50V，也有PCR产物、150V，都是等胶凉了以后先点样再放进电泳槽的。
VL Photo-print 215 SD成像系统。
出的条带都不是很干净的一条线，有点带点“凹”字形，有的就成了“口”字形了（接近点样孔的大小）。
帮忙分析下都可能会有哪些因素

总DNA






口字形
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1楼 2012-02-21 17:12:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的体系是：2ul样品+4ul溴酚蓝上样，溴酚蓝太多咯，这样会造成DNA挂壁的，也就是挂在胶上，跑的时候就容易出现凹陷的形状。loading buffer 一般有6*和10*的，你2ul样品+0.4ul loading buffer 上样就可以了，电压在60-140 v这样的效果都不错的，你可以试试
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augusten
4楼2012-02-22 09:54:21
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普通回帖

augusten

铁虫 (初入文坛)
补充说明一下
植物叶子提取的DNA，第一张没有稀释，第二张稀释的，第三张为PCR后的。
2ul样品+4ul溴酚蓝上样
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2楼2012-02-21 17:19:38
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用薄一点的梳子，电流不要太大。
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但愿人长久
3楼2012-02-22 09:18:15
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augusten

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-02-22 09:54:21:
你用的体系是：2ul样品+4ul溴酚蓝上样，溴酚蓝太多咯，这样会造成DNA挂壁的，也就是挂在胶上，跑的时候就容易出现凹陷的形状。loading buffer 一般有6*和10*的，你2ul样品+0.4ul loading buffer 上样就可以了，电 ...

谢谢！
开始是4ul溴酚蓝，后来有减半，还是会有这种情况，包括Marker也会有。
先点样后入槽会不会有影响呢？等点好样，都干得差不多了。开始只是跟着师姐做，还没尝试先入槽后点样，但是感觉不方便啊。
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5楼2012-02-22 16:31:23
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kidluag

金虫 (正式写手)

不自信的师生
引用回帖:
5楼: Originally posted by augusten at 2012-02-22 16:31:23:
谢谢！
开始是4ul溴酚蓝，后来有减半，还是会有这种情况，包括Marker也会有。
先点样后入槽会不会有影响呢？等点好样，都干得差不多了。开始只是跟着师姐做，还没尝试先入槽后点样，但是感觉不方便啊。

我们都是先入槽后点样的啊
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被迫的无知小小博
6楼2012-02-23 00:24:55
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
augusten(金币+3): ★有帮助 2012-02-23 10:33:07
正常的做法应该是先入槽，电泳缓冲液没过胶面，拔梳子，在槽中点样，这样电泳出来不会有什么问题。
我分析，你的问题出在先点样再入槽，一来样品容易干，二来如果拔梳子晚点儿的话，加样孔还容易损坏。另外，溴酚蓝不能太多，但是稍多点也不会影响电泳结果。
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
7楼2012-02-23 09:15:13
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先入槽后点样简单的很。试试！
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
8楼2012-02-23 09:16:09
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by augusten at 2012-02-22 16:31:23:
谢谢！
开始是4ul溴酚蓝，后来有减半，还是会有这种情况，包括Marker也会有。
先点样后入槽会不会有影响呢？等点好样，都干得差不多了。开始只是跟着师姐做，还没尝试先入槽后点样，但是感觉不方便啊。

你是这样上样的啊？建议你还是先入槽再上样。如果你觉得自己不熟练的话可以拿没有用的胶多练习，把loading buffer稀释了直接加孔里。
Marker也会有的话还可能和你用的梳子大小，电泳液浓度，电压大小有关呢
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9楼2012-02-23 09:29:42
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augusten

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by kidluag at 2012-02-23 00:24:55:
我们都是先入槽后点样的啊

我本科做实验是这么点的，但是现在这边点样量比较大，一般性的检测只要看到有条带、不会漂样就行了。
就是个人感觉那片子出来太难看了。
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10楼2012-02-23 10:29:29
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