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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA电泳凝胶成像系统条带很宽，都有哪些因素
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augusten

铁虫 (初入文坛)

[求助] DNA电泳凝胶成像系统条带很宽，都有哪些因素

平板电泳，1×TBE琼脂糖1.2%，有总DNA、50V，也有PCR产物、150V，都是等胶凉了以后先点样再放进电泳槽的。
VL Photo-print 215 SD成像系统。
出的条带都不是很干净的一条线，有点带点“凹”字形，有的就成了“口”字形了（接近点样孔的大小）。
帮忙分析下都可能会有哪些因素

总DNA






口字形
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1楼2012-02-21 17:12:27
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的体系是：2ul样品+4ul溴酚蓝上样，溴酚蓝太多咯，这样会造成DNA挂壁的，也就是挂在胶上，跑的时候就容易出现凹陷的形状。loading buffer 一般有6*和10*的，你2ul样品+0.4ul loading buffer 上样就可以了，电压在60-140 v这样的效果都不错的，你可以试试
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augusten
4楼2012-02-22 09:54:21
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by augusten at 2012-02-22 16:31:23:
谢谢！
开始是4ul溴酚蓝，后来有减半，还是会有这种情况，包括Marker也会有。
先点样后入槽会不会有影响呢？等点好样，都干得差不多了。开始只是跟着师姐做，还没尝试先入槽后点样，但是感觉不方便啊。

你是这样上样的啊？建议你还是先入槽再上样。如果你觉得自己不熟练的话可以拿没有用的胶多练习，把loading buffer稀释了直接加孔里。
Marker也会有的话还可能和你用的梳子大小，电泳液浓度，电压大小有关呢
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9楼2012-02-23 09:29:42
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