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argon8436

木虫 (小有名气)

[求助] 量子点标记的DNA电泳成像问题

我们做了一个量子点标记DNA的实验,现在用琼脂糖凝胶电泳测一下DNA和量子点的滞孔浓度。图中上样孔从上到下的样品分别为倍比稀释的量子点TE溶液和一定浓度的DNA TE溶液,上面的量子点浓,下面的稀。用90V跑了20分钟。跑电泳时候观测到孔1-4均向负极跑,孔5看不出来。跑完后,胶在阳光下的图片和在凝胶成像仪上的图片如上图。
阳光下:孔1-4的溴酚蓝显示向正极跑,孔2-4的上样孔中还留有少量溴酚蓝,且贴在了负极一侧。孔5显示向负极跑。(跟电泳中观察到的不太一样)
凝胶成像:只有孔1的上样孔中有一点荧光。且观察到上样孔到负极的胶上有类似溴酚蓝的带。
请问:1、电泳中和电泳后的溴酚蓝跑的现象不一样,是为什么?
          2、凝胶成像下的类似溴酚蓝的带是什么?它和阳光下的图片显示的溴酚蓝的带为什么方向不一样?
          3、量子点在琼脂糖凝胶电泳后还会不会在紫外下发光?电泳会对量子点发光产生什么样的影响?
          4、量子点标记DNA后,对DNA和EB的结合有没有影响?
          5、除了孔1,别的孔都没有荧光,那么DNA跑哪儿去了?还是不能和EB结合?那在此情况下如何显色?

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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
argon8436: 金币+100, ★★★很有帮助, 确实很有启发,太感谢了! 2012-12-24 09:10:35
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励热心积极应助 2012-12-24 10:48:25
1、电泳中和电泳后的溴酚蓝跑的现象不一样,是为什么?
是一样的。不应该不一样。不过,要看你的量子点是否都是带负电荷的?是否重复实验都是这样的结果?
2、凝胶成像下的类似溴酚蓝的带是什么?它和阳光下的图片显示的溴酚蓝的带为什么方向不一样?
溴酚蓝的作用不过是指示你的胶大概跑得什么程度。从未有不一样的现象。
3、量子点在琼脂糖凝胶电泳后还会不会在紫外下发光?电泳会对量子点发光产生什么样的影响?
量子点在紫外下是会发光的,电泳时去掉EB才会有荧光的。EB会淬灭荧光。
4、量子点标记DNA后,对DNA和EB的结合有没有影响?
量子点指示作用,对于DNA没有什么影响,而且agarose千万不要EB才会有量子点的光的。
5、除了孔1,别的孔都没有荧光,那么DNA跑哪儿去了?还是不能和EB结合?那在此情况下如何显色?
如果有荧光来自的只可能是本身的荧光蛋白和量子点,可以在你的量子点拍照后染色DNA,可以前后位置判断结合
修身、齐家、治国、平天下
2楼2012-12-23 16:07:28
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普通回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主为什么要用量子点标记DNA呢?学习一下。。。
keepon
3楼2012-12-23 18:21:43
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我来找兔子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alicelchf at 2012-12-23 16:07:28
1、电泳中和电泳后的溴酚蓝跑的现象不一样,是为什么?
是一样的。不应该不一样。不过,要看你的量子点是否都是带负电荷的?是否重复实验都是这样的结果?
2、凝胶成像下的类似溴酚蓝的带是什么?它和阳光下的图片 ...

请问你们说的EB是什么?
4楼2020-08-19 12:46:26
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