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lqlmdyw

铁虫 (初入文坛)

[求助] 清高手帮忙,别人设计了一段引物,扩不出想要的目的片段

前几天老板给了一对引物,扩增每一段的序列,一直扩不出了,老板让我在NCBI上把该基因的全序列下载下来,然后找出保守区域,把设计的引物和保守区域进行对比。找出突变位点,然后修改自己的引物。我出的这些,实际上我不会操作,请高手帮我详细的说说具体的则呢操作。小弟新来的积分不多,希望好心人不嫌分数多少,帮帮忙,再次小弟感激不尽,谢谢了!
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lqlmdyw: 金币+3, ★★★很有帮助, 你说的是一方面,不过会不会是病毒某个基因变异了,引物这正好在这段变异的区域里,所以没有跑出来 2012-12-14 14:58:34
你可以先到NCBI prime Blas t查阅一下引物的特异性,看看这个引物能不能PCR出你所要的目的条带。如果特异性好的话,就是PCR扩增体系的问题,比如你选用的酶好不好,这个是主要的因素。
2楼2012-12-14 10:39:11
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lqlmdyw: 金币+2, 有帮助, blast 和primer这个我都知道,关键操作过程我还是有些不懂,不过,谢谢了! 2012-12-14 14:55:04
自己先用软件分析啊,blast 和primer premier都能解决的
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2012-12-14 11:25:07
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