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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 清高手帮忙，别人设计了一段引物，扩不出想要的目的片段
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lqlmdyw

铁虫 (初入文坛)

[求助] 清高手帮忙，别人设计了一段引物，扩不出想要的目的片段

前几天老板给了一对引物，扩增每一段的序列，一直扩不出了，老板让我在NCBI上把该基因的全序列下载下来，然后找出保守区域，把设计的引物和保守区域进行对比。找出突变位点，然后修改自己的引物。我出的这些，实际上我不会操作，请高手帮我详细的说说具体的则呢操作。小弟新来的积分不多，希望好心人不嫌分数多少，帮帮忙，再次小弟感激不尽，谢谢了!
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1楼 2012-12-13 23:16:15
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lqlmdyw: 金币+3, ★★★很有帮助, 你说的是一方面，不过会不会是病毒某个基因变异了，引物这正好在这段变异的区域里，所以没有跑出来 2012-12-14 14:58:34
你可以先到NCBI prime Blas t查阅一下引物的特异性，看看这个引物能不能PCR出你所要的目的条带。如果特异性好的话，就是PCR扩增体系的问题，比如你选用的酶好不好，这个是主要的因素。
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2楼2012-12-14 10:39:11
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lqlmdyw: 金币+2, ★有帮助, blast 和primer这个我都知道，关键操作过程我还是有些不懂，不过，谢谢了！ 2012-12-14 14:55:04
自己先用软件分析啊，blast 和primer premier都能解决的
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
3楼2012-12-14 11:25:07
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