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messi1910

铜虫 (初入文坛)

[求助] qPCR总出现非特异性扩增,到底是怎么回事?

1. 我提取了两个样品的RNA,然后反转录为cDNA;
2. 通过普通的PCR检测引物和cDNA情况,显示特异性很好,单带,如下图:
3. 我在qPCR的时候扩增曲线的重复性还是不错的,但是溶解曲线就不好了,总是有个小峰,就是所谓的非特异性扩增吧,几乎所有的靶标都是这样的,actin内参也是的,但这个内参,我原来用也可以啊,没这种情况;难道这是模板的问题,但我的普通PCR扩增的还挺好的啊;

请大家帮我分析下什么原因,和qPCR的设置我想没太大的关系吧。

普通PCR



溶解曲线



让我伤心的1
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solomon7811

新虫 (小有名气)

应该是引物二聚体。可以考虑换引物,或者考虑使用去除引物二聚体的一些商业试剂。
12楼2012-12-13 10:09:36
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