24小时热门版块排行榜    

查看: 2331  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 做克隆挑斑有什么技巧吗?

做克隆挑斑有什么技巧吗?咋样才能挑到更多的阳性呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
longyh6411: 金币+100, 有帮助 2013-01-13 11:34:54
和连接效率相关吧,我上次挑的基本都是阳性,并且也没做什么蓝白斑筛选,就是随机挑的。
菌落PCR验证时,可以把菌挑下来之后在10ul dd水中吹打混匀,以1ul作为模板做PCR,其他的用来摇菌。
在这之前可以先把PCR的其他组分加好,最后加模板。
9楼2012-12-10 21:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个没有什么技巧吧,完全取决于你的连接的阳性率,你的载体质粒有没有酶切开,单酶切载体有没有去磷酸化,实验过程中有没有完整质粒污染,应该在这些方面加强控制
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-08 23:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
挑那些长得比较均匀的菌落,如果周围有很小的,那些不要挑,基本上没有东西,其他的就是看你的运气了……
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2012-12-09 10:08:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yylin1984

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
(1)挑斑前在4度保存24小时,不要选用蓝色晕纹的;(2)挑斑后用酶切检测和PCR检测是否是阳性;
112
5楼2012-12-09 11:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见