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longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 做克隆挑斑有什么技巧吗?

做克隆挑斑有什么技巧吗?咋样才能挑到更多的阳性呢?
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
挑那些长得比较均匀的菌落,如果周围有很小的,那些不要挑,基本上没有东西,其他的就是看你的运气了……
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2012-12-09 10:08:30
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个没有什么技巧吧,完全取决于你的连接的阳性率,你的载体质粒有没有酶切开,单酶切载体有没有去磷酸化,实验过程中有没有完整质粒污染,应该在这些方面加强控制
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-08 23:38:34
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yylin1984

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
(1)挑斑前在4度保存24小时,不要选用蓝色晕纹的;(2)挑斑后用酶切检测和PCR检测是否是阳性;
112
5楼2012-12-09 11:47:03
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

或许你可以先用菌落PCR做一筛选
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-12-09 13:51:22
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