应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关LAMP的交流。。。
161/2返回列表12下一页
查看: 3214  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

养活它

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关LAMP的交流。。。 已有1人参与

LAMP反应体系中buffer一般加多少？
      dNTP要求25ul体系中终浓度是2.5mmol/l，可是我现在买回来的dNTP浓度就是这么多，该怎么取？
      Bst酶现在是8000U/ml，可是文献上要求是8U，两者单位不统一啊。。。怎么办?
           还有模板最终是用多少TE溶解的（其中加Rnase吗）？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-06 16:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

TE中EDTA对酶有抑制，但是buffer里面有足够高的Mg离子来缓和这种抑制吧，DNA如果不放在TE里，降解会很快的，如果样品需要反复使用，建议高浓度保存在TE中，使用前用灭菌纯水稀释。
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
7楼2012-12-10 16:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

LAMP实验，有时候能扩出来、有时候没有。我觉得还是体系不太佳，引物浓度及比例比较重要，长短引物浓度比从1：4到1:8都做一下，模板1--2ul，dNTP10mmol/L的一般加2.5ul，Mg2+25mmol/L可以加2--4ul。一般在反应体系，加甜菜碱终浓度1M。还有在其他试剂都加好后，95℃温育5min，冷却后再加BstDNA酶，再反应。反应温度可以在60-65℃都做一下。希望对你有帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-12-10 19:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songxuebai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 养活它 at 2012-12-10 16:51:00
非常感谢您的帮助，我是初次接触LAMP实验，有时候可以做成功，看见的白色沉淀很多，但是，有时候就看不见了，不知道是什么原因，请您指点。我引物终浓度依次是F3/B30.4um/l  FIP/BIP 2.4um/l  LF/LB1.2um/l   dNTP ...

LAMP实验，有时候能扩出来、有时候没有。我觉得还是体系不太佳，引物浓度及比例比较重要，长短引物浓度比从1：4到1:8都做一下，模板1--2ul，dNTP10mmol/L的一般加2.5ul，Mg2+25mmol/L可以加2--4ul。一般在反应体系，加甜菜碱终浓度1M。还有在其他试剂都加好后，95℃温育5min，冷却后再加BstDNA酶，再反应。反应温度可以在60-65℃都做一下。希望对你有帮助。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-12-10 19:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
buffer这个应该根据浓度确定就行了吧，公司有卖高浓度dNTP的，我记得好像是10的，你找目录看一下就行了，单卖的；酶的问题更简单，肯定是要稀释的啊，需要8U，你加8微升不就正好吗
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-06 18:03:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了模板的问题，我们实验室一般是用无菌去离子水溶解的，TE中有的东西对酶不好，平时都是用水溶解的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-06 18:05:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做了很多次LAMP实验，一般10xbuffer加2.5ul就可以了，8000U/ml的BstDNA酶一般加1ul，引物浓度一般FIP/BIP:F3/B3=8：1，TE和超纯水都可以的。希望对你有帮助。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

养活它
4楼2012-12-07 19:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养活它

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by songxuebai at 2012-12-07 19:55:35
我做了很多次LAMP实验，一般10xbuffer加2.5ul就可以了，8000U/ml的BstDNA酶一般加1ul，引物浓度一般FIP/BIP:F3/B3=8：1，TE和超纯水都可以的。希望对你有帮助。

非常感谢您的帮助，我是初次接触LAMP实验，有时候可以做成功，看见的白色沉淀很多，但是，有时候就看不见了，不知道是什么原因，请您指点。我引物终浓度依次是F3/B30.4um/l  FIP/BIP 2.4um/l  LF/LB1.2um/l   dNTP2.8mmol/l   模板 2ul    Bst 酶 1ul  buffer 4ul，您看看有啥问题吗？
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-10 16:51:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养活它

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zdfang83 at 2012-12-06 18:05:10
忘了模板的问题，我们实验室一般是用无菌去离子水溶解的，TE中有的东西对酶不好，平时都是用水溶解的。

谢谢，以后注意了。
回复此楼
6楼2012-12-10 16:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养活它

新虫 (初入文坛)
谢谢您，我再试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
10楼2012-12-10 20:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 养活它 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-05 15:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:14 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 15:03 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 14:06 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:44 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:33 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 6/300 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 12:16 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 9/450 2026-11-05 09:20 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭