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养活它

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关LAMP的交流。。。已有1人参与

LAMP反应体系中buffer一般加多少?
      dNTP要求25ul体系中终浓度是2.5mmol/l,可是我现在买回来的dNTP浓度就是这么多,该怎么取?
      Bst酶现在是8000U/ml,可是文献上要求是8U,两者单位不统一啊。。。怎么办?
           还有模板最终是用多少TE溶解的(其中加Rnase吗)?
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songxuebai

金虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 养活它 at 2012-12-10 16:51:00
非常感谢您的帮助,我是初次接触LAMP实验,有时候可以做成功,看见的白色沉淀很多,但是,有时候就看不见了,不知道是什么原因,请您指点。我引物终浓度依次是F3/B30.4um/l  FIP/BIP 2.4um/l  LF/LB1.2um/l   dNTP ...

LAMP实验,有时候能扩出来、有时候没有。我觉得还是体系不太佳,引物浓度及比例比较重要,长短引物浓度比从1:4到1:8都做一下,模板1--2ul,dNTP10mmol/L的一般加2.5ul,Mg2+25mmol/L可以加2--4ul。一般在反应体系,加甜菜碱终浓度1M。还有在其他试剂都加好后,95℃温育5min,冷却后再加BstDNA酶,再反应。反应温度可以在60-65℃都做一下。希望对你有帮助。
9楼2012-12-10 19:36:26
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查看全部 16 个回答

zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
buffer这个应该根据浓度确定就行了吧,公司有卖高浓度dNTP的,我记得好像是10的,你找目录看一下就行了,单卖的;酶的问题更简单,肯定是要稀释的啊,需要8U,你加8微升不就正好吗
2楼2012-12-06 18:03:58
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zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了模板的问题,我们实验室一般是用无菌去离子水溶解的,TE中有的东西对酶不好,平时都是用水溶解的。
3楼2012-12-06 18:05:10
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songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做了很多次LAMP实验,一般10xbuffer加2.5ul就可以了,8000U/ml的BstDNA酶一般加1ul,引物浓度一般FIP/BIP:F3/B3=8:1,TE和超纯水都可以的。希望对你有帮助。

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4楼2012-12-07 19:55:35
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