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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关LAMP的交流。。。
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养活它

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关LAMP的交流。。。 已有1人参与

LAMP反应体系中buffer一般加多少？
      dNTP要求25ul体系中终浓度是2.5mmol/l，可是我现在买回来的dNTP浓度就是这么多，该怎么取？
      Bst酶现在是8000U/ml，可是文献上要求是8U，两者单位不统一啊。。。怎么办?
           还有模板最终是用多少TE溶解的（其中加Rnase吗）？
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1楼 2012-12-06 16:07:39
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zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了模板的问题，我们实验室一般是用无菌去离子水溶解的，TE中有的东西对酶不好，平时都是用水溶解的。
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3楼2012-12-06 18:05:10
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zdfang83

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
buffer这个应该根据浓度确定就行了吧，公司有卖高浓度dNTP的，我记得好像是10的，你找目录看一下就行了，单卖的；酶的问题更简单，肯定是要稀释的啊，需要8U，你加8微升不就正好吗
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2楼2012-12-06 18:03:58
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songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做了很多次LAMP实验，一般10xbuffer加2.5ul就可以了，8000U/ml的BstDNA酶一般加1ul，引物浓度一般FIP/BIP:F3/B3=8：1，TE和超纯水都可以的。希望对你有帮助。
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养活它
4楼2012-12-07 19:55:35
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养活它

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by songxuebai at 2012-12-07 19:55:35
我做了很多次LAMP实验，一般10xbuffer加2.5ul就可以了，8000U/ml的BstDNA酶一般加1ul，引物浓度一般FIP/BIP:F3/B3=8：1，TE和超纯水都可以的。希望对你有帮助。

非常感谢您的帮助，我是初次接触LAMP实验，有时候可以做成功，看见的白色沉淀很多，但是，有时候就看不见了，不知道是什么原因，请您指点。我引物终浓度依次是F3/B30.4um/l  FIP/BIP 2.4um/l  LF/LB1.2um/l   dNTP2.8mmol/l   模板 2ul    Bst 酶 1ul  buffer 4ul，您看看有啥问题吗？
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5楼2012-12-10 16:51:00
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