| 查看: 2731 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
wwm2008505金虫 (小有名气)
|
[求助]
双酶切之后，线状质粒的连接问题
|
||
| 我想把一个34bp的DNA片段和一个经过酶切后的质粒（已经成线状了），设计的时候他们有粘性末端，然后用T4连接酶4度过夜连接，载体和插入片段mol比是1:5，再转化到感受态细胞中，涂平板。长出来的菌落很少，挑了之后摇菌，时间长才变浑浊。再做菌液PCR没有看到检测的条带。求助，是哪一步不对，或者是需要改进的 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有143人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环形质粒酶切电泳图分析求解
已经有25人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- 【求助/交流】酶连转化
已经有24人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】DNA纯化问题
已经有23人回复
- 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
已经有12人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2012-12-04 15:11:07
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-07 16:31:29
wwm2008505: 金币+5, ★有帮助, 谢谢解答 2012-12-09 15:05:44
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-07 16:31:29
wwm2008505: 金币+5, ★有帮助, 谢谢解答 2012-12-09 15:05:44
|
质粒是单酶切还是双酶切？ 如果是单酶切必须去磷酸化处理防止自连。 如果是双酶切，T4这一套是否有效，别人是否用过，因为buffer里含ATP，若buffer失效也会导致连接失败。 另外，也可能是PCR的问题，是否做了阳性和阴性对照。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wwm20085052楼2012-12-04 10:52:16
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
3楼2012-12-04 11:29:36
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
4楼2012-12-04 13:37:40
