应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】拟南芥保卫细胞原生质体RNA提取电泳图，出现反向弥散？
51/1返回列表
查看: 2850  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sunny_0211

银虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】拟南芥保卫细胞原生质体RNA提取电泳图，出现反向弥散？ 已有1人参与

我需要先对拟南芥保卫细胞提取原生质体，需要大概5小时左右，然后加入Trozol试剂，氯仿去蛋白，异丙醇沉淀，测RNA含量在4000ng/ul左右，但是甲醛变型胶电泳无条带，或是出现5S条带。
    请问是RNA降解了吗？还是我就没提取出来？前期的酶解提取原生质体过程较长。对后续提取RNA是否产生了影响？
    本人计划提取RNA用于文库构建，一直不能解决RNA提取的问题，十分着急，希望做过这方面实验的同学、老师、专家能够给予宝贵意见，不胜感激
  
PS：有时候点样孔反向出现弥散状条带，于是反向电泳出现一条亮带，这是什么情况？

FX-RNA_副本.jpg



RNA1_副本.jpg



RNA25min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-30 13:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落叶的轨迹

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最近也要开始提保卫细胞原生质体了，所以才开始关注这方面的帖子，刚刚看到你的提问了，也不知能否联系到你，
实验方面刚刚开始就遇到了很多问题，希望可以和过来人交流一下，盼望回复
赞一下 回复此楼
7楼2015-07-23 11:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunny_0211: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢您 2012-12-09 23:53:27
样品处理时间过长对RNA肯定有影响。如果非要处理的话，能否在处理过成中加蛋白酶K抑制核酸酶？
此外，你的样品是否做了DNA消化？感觉杂质多。反向电泳条带可能也说明有其他杂质结合核酸，带正点，所以往反向跑了。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-12-01 09:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunny_0211: 金币+2, ★有帮助, 谢谢您 2012-12-09 23:57:29
你这处理了五个小时，再牛的RNA也降解了……
还是老老实实液氮研磨之后用Trizol融比较好
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-12-01 13:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunny_0211

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 09:09:03
样品处理时间过长对RNA肯定有影响。如果非要处理的话，能否在处理过成中加蛋白酶K抑制核酸酶？
此外，你的样品是否做了DNA消化？感觉杂质多。反向电泳条带可能也说明有其他杂质结合核酸，带正点，所以往反向跑了。

你好 谢谢您的意见  样品没有经过DNA消化 杂质较多 我也怀疑是杂质结合了核酸 至于处理时间的问题 我参照了拟南芥原生质体转化的方法，其中在提取出原生质体后还要进行约16小时的转化，使目的蛋白表达观察荧光，进行定位，所以，估计不是由于前期处理时间过长造成的。万分感谢您 十分抱歉我回复晚了（生病了） 谢谢您
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-09 23:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+4 David1982 2026-10-13 7/350 2026-10-14 14:24 by 13108017953
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +10 Isak0320 2026-10-12 14/700 2026-10-14 11:39 by thegarfield
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭