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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 各种综合问题：酶切胶回收质粒浓缩测浓度

我要罢工了……
求助各位虫友：
1.有关双酶切胶回收之后的回收效率问题：
EcoRI XhoI 双酶切体系：
酶各2ul
   BUFFER H 4ul
   模板DNA 1ug
   ddH20 up to 40 ul
   酶切 37℃ 4-5h
   10Xloading buffer 4ul 终止酶切
跑出来的条带亮
2.用TAKARA做胶回收
3.测浓度-Eppendorf BioPhotometer Plus核酸蛋白测定仪
问题：为什么测出来的是负值？只有0D260 0D280为零

4.有关质粒DNA浓缩
原来是由于提出来的质粒 OD比过大所以想用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA
之前做过相关的实验（当时情况是40ng/ul OD比1.8左右 4支浓缩之后为148ng/ul)
这次做了之后用Eppendorf BioPhotometer Plus核酸蛋白测定仪测浓度值各种崩溃（有正常的也有负值也有无0）为同一批一同沉淀进行的我不明白是不是其中的实验哪步有差错但本人确实不太知道
方法：1/10V 醋酸钠 +2.5V冷无水乙醇 -20℃保存30-60min
      12000r 离心5-10分钟弃液
   用冷乙醇清洗沉淀干燥
   用30-50ulH20清洗离心可得。

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1楼 2012-11-28 16:35:17

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QUENIX2321

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 08:52:33
1，请先确定回收是成功的，可以取回收DNA 2微升跑个胶即可。如果A260，280值是0，只能说明没有回收成功，或者你的NANOTROP出了问题。
2，用其他人的原来已经测过浓度的质粒，用这个机器测一下看是否是机器的问题。 ...

改用微量核酸检测仪进行检测
质粒浓缩的OD比为1.8-1.9 浓浓缩浓度为100-140ng/ul

那个之前用的仪器使用方法没有变测过的使用方法一样我不太明白为什么有的时候能出来值而大多数时间我用的时候出来的值都让我很崩溃因为我实验室其他师兄师姐用我测出来的值都满正常的 OD也都在1.9附近但我不知道是不是灵敏度的问题他们的值一般都是200-300ng/ul
而我的样品一般只有100左右而经过酶切胶回收之后的话就只有20-30ng/ul