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hellen1987木虫 (小有名气)
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2011年5月买的亚油酸,开封了,现在还能用吗?
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当时买的亚油酸没有充氮密封保存,就直接放在4摄氏度冰箱,一年多了,会不会被氧化了不能用了?大家谁比较有经验可以告诉我吗? 我们买这个亚油酸是用作脂肪氧化酶活力测定的底物。 |
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hellen1987
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LOX酶活的测定 底物溶液配制:在N2保护下,取111μL亚油酸加入到10mL容量瓶中,用无水乙醇定容到10mL,得到浓度为1%(W/V)的亚油酸-无水乙醇溶液。取上述溶液3.55mL,加入40μL吐温-20。旋转蒸发除去乙醇,残余固形物溶解在50mL,0.05mol/L的Na2HPO4溶液中,往其中滴加1N NaOH,调节pH值至9.0。该底物溶液中亚油酸浓度和吐温-20的浓度分别为2.53×10-3mol/L、0.08%(w / v)。此溶液采用N2保护,5℃避光保存,备用。 粗酶液配制:将上述酶提取液用冷的0.1M醋酸(盐)缓冲液(pH4.5)稀释20倍,作为酶测定液,5℃冷藏,备用。 紫外分光光度法分析:检测温度25℃,检测波长234nm[。 反应液:2.0 mL缓冲溶液,200μL底物溶液,50μL粗酶液; 参比液:2.0 mL缓冲溶液,200μL底物溶液,50μL钝化处理的粗酶液。 反应在Beckman DU800分光光度计中进行,检测波长234nm,分光光度计调零时,参比池和样品池分别装入参比溶液,调零后,倒掉样品池中的参比液,加入2.0 mL缓冲溶液,200μL底物溶液,立刻加入50μL酶溶液,迅速混合,样品池放入原位,开始计时,该过程不超过10 s,光密度增量从最初的线性部分开始计算。 |
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13楼2014-07-31 18:10:57
sugz
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