应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？
51/1返回列表
查看: 2407  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？

如题：怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？除了用超声波还有没有其他方法？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-19 13:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gg880712

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Marado at 2012-11-20 17:00:16
超声波破碎后上清没有酶活可能是你超声波条件的问题
1：破碎细胞没破开，功率太低，时间太短都可能造成细胞没碎开，没碎开哪来酶活，你破碎后澄清一些没，相比破碎之前？
2：蛋白失活，不太清楚你是破的野生菌还 ...

我破碎后是澄清了些的。。至于蛋白有没有变性，没仔细看。再试一把好了。我破的是野生型菌和突变体（敲除了一个基因的），应该不存在你说的包涵体的问题。
p.s.谢谢啦
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-20 17:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用无去垢剂缓冲液重悬，冰水浴超声破碎，离心取上清。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-19 14:04:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该可以用离心的方法吧，破坏细胞结构
赞一下 回复此楼
may
3楼2012-11-19 15:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gg880712: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 18:08:39
小丹木木: 金币+2, 欢迎应助 2012-11-20 17:25:03
这主要是涉及大破碎方法的问题：
常用的有  1. 超声波破碎，需要控制低温、工作/间隔时间、功率等；
              2. 溶菌酶+DNase，这个是温和的做法，应该适合楼主使用，protocol网上有很多；
              3. 高压破碎等。
赞一下 回复此楼
小兵一个
4楼2012-11-19 15:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭