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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

[交流] 【求助/交流】关于细菌内蛋白相互作用的研究 已有6人参与

如题,如何设计实验方案啊?有什么方法,请过来人指点
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一切都会好的,雨后的天空更加明朗!人生苦短,快乐至上,加油!
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-07 17:02:38:
如题,如何设计实验方案啊?有什么方法,请过来人指点

用酵母双杂交吧
2楼2010-06-07 21:27:53
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-07 22:04:36
蛋白-蛋白相互作用,体外实验的话酵母双杂很经典啊

但是LZ说“细菌内蛋白相互作用”,意思是要做in situ吗?不光要看是否作用,还要定位作用位点?
3楼2010-06-07 21:50:53
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-06-07 21:27:53:

用酵母双杂交吧

实验室没这体系
一切都会好的,雨后的天空更加明朗!人生苦短,快乐至上,加油!
4楼2010-06-08 09:44:16
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-07 21:50:53:
蛋白-蛋白相互作用,体外实验的话酵母双杂很经典啊

但是LZ说“细菌内蛋白相互作用”,意思是要做in situ吗?不光要看是否作用,还要定位作用位点?

目前只需要确认二者是否相互即可
一切都会好的,雨后的天空更加明朗!人生苦短,快乐至上,加油!
5楼2010-06-08 09:44:55
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-08 09:44:55:

目前只需要确认二者是否相互即可

那就很简单了,做酵母双杂交便可啦
怕有假阳性的话做PULLDOWN
6楼2010-06-08 11:44:02
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-08 09:44:16:

实验室没这体系

那就搜集质粒、酵母细胞株,摸索着建立体系嘛
总要有第一个人开始做的
7楼2010-06-08 11:58:56
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yidalong

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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scelab(金币+2):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-10 22:48:10
酵母双杂交是真核生物体系,楼主要的是原核的,理论上应该更简单。
而且很早以前就有人开发了细菌双杂交系统,楼主可以找找看
8楼2010-08-10 17:50:39
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-08-10 22:48:18
对于简单一点的验证可以考虑做pulldown

把其中一基因利用原核表达,加亲和标签挂在柱子上。表达猜测与其相互作用的蛋白,流穿柱子,如果两者有较强的相互作用,第二个蛋白就有可能通过与第一个蛋白的相互作用挂在柱子上。

这种方法做起来相对简单,但是仅适合相互作用力强的蛋白。
9楼2010-08-10 22:42:15
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