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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于细菌内蛋白相互作用的研究
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

[交流] 【求助/交流】关于细菌内蛋白相互作用的研究 已有6人参与

如题，如何设计实验方案啊？有什么方法，请过来人指点
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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
1楼 2010-06-07 17:02:38
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-07 17:02:38:
如题，如何设计实验方案啊？有什么方法，请过来人指点

用酵母双杂交吧
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2楼2010-06-07 21:27:53
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-07 22:04:36
蛋白-蛋白相互作用，体外实验的话酵母双杂很经典啊

但是LZ说“细菌内蛋白相互作用”，意思是要做in situ吗？不光要看是否作用，还要定位作用位点？
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3楼2010-06-07 21:50:53
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-06-07 21:27:53:

用酵母双杂交吧

实验室没这体系
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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
4楼2010-06-08 09:44:16
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-07 21:50:53:
蛋白-蛋白相互作用，体外实验的话酵母双杂很经典啊

但是LZ说“细菌内蛋白相互作用”，意思是要做in situ吗？不光要看是否作用，还要定位作用位点？

目前只需要确认二者是否相互即可
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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
5楼2010-06-08 09:44:55
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-08 09:44:55:

目前只需要确认二者是否相互即可

那就很简单了，做酵母双杂交便可啦
怕有假阳性的话做PULLDOWN
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6楼2010-06-08 11:44:02
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-06-08 09:44:16:

实验室没这体系

那就搜集质粒、酵母细胞株，摸索着建立体系嘛
总要有第一个人开始做的
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7楼2010-06-08 11:58:56
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yidalong

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-10 22:48:10
酵母双杂交是真核生物体系，楼主要的是原核的，理论上应该更简单。
而且很早以前就有人开发了细菌双杂交系统，楼主可以找找看
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8楼2010-08-10 17:50:39
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-08-10 22:48:18
对于简单一点的验证可以考虑做pulldown

把其中一基因利用原核表达，加亲和标签挂在柱子上。表达猜测与其相互作用的蛋白，流穿柱子，如果两者有较强的相互作用，第二个蛋白就有可能通过与第一个蛋白的相互作用挂在柱子上。

这种方法做起来相对简单，但是仅适合相互作用力强的蛋白。
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9楼2010-08-10 22:42:15
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