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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？
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gg880712

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？

如题：怎样使细菌细胞裂解但胞内的蛋白（例如酶）不失活？除了用超声波还有没有其他方法？
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1楼 2012-11-19 13:35:14
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gg880712

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 彬心玉壶 at 2012-11-19 21:27:00
我用的是   高压破碎（French press） 然后离心去掉碎片。可以根据蛋白质的特性（可溶，或者不可溶，） 超速离心，进一步去掉一些杂蛋白。

具体怎么做呢？可不可以详细说一下？
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7楼2012-11-20 11:09:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用无去垢剂缓冲液重悬，冰水浴超声破碎，离心取上清。
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2楼2012-11-19 14:04:05
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该可以用离心的方法吧，破坏细胞结构
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may
3楼2012-11-19 15:01:24
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gg880712: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 18:08:39
小丹木木: 金币+2, 欢迎应助 2012-11-20 17:25:03
这主要是涉及大破碎方法的问题：
常用的有  1. 超声波破碎，需要控制低温、工作/间隔时间、功率等；
              2. 溶菌酶+DNase，这个是温和的做法，应该适合楼主使用，protocol网上有很多；
              3. 高压破碎等。
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小兵一个
4楼2012-11-19 15:34:48
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