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大脚-love-me

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于酵母转化,急急急,跪求大神们帮忙~

大家好,小女现在正在做酿酒酵母转化,做了快一个月了,还没转出来,老板催,我快急死了。求大家帮帮忙
我做的是敲除组件的转化,也就是线性化的质粒转化,书上说线性化的质粒不好转化,效率低,我用的电转,转了好几次了,没转出来,
求助大家,如果就用环状的质粒转化,会不会同源重组的效率很低呀,还有就是线性化质粒转化大家一般用哪种方法,谢谢大家了,祝大家都能实验顺利~
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我之前做过酵母转化,是环状质粒转的,具体转化方法就是按照clone tech的说明书转的AcLi法,转的还好啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-19 11:51:12
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txq0937

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们做的实验,都是质粒线性化过后转的,效果不错
能人
3楼2012-11-19 14:31:53
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linxt2005

金虫 (小有名气)

请教一下各位虫友,酿酒酵母与毕赤酵母转化及表达测试的方法类似吗?
目前只做过毕赤酵母的,还没有尝试过酿酒酵母,了解一下。
小兵一个
4楼2012-11-19 14:45:23
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花素馨

新虫 (初入文坛)

亲,昨天用的我师妹的号发的帖子,这是我,
环状的质粒是比较好转,但是同源重组效率不行呀,
5楼2012-11-20 10:14:35
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花素馨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-19 11:51:12
我之前做过酵母转化,是环状质粒转的,具体转化方法就是按照clone tech的说明书转的AcLi法,转的还好啊

亲,你的实验操作能给我一份么,还有就是对质粒的要求是什么,
6楼2012-11-20 10:15:38
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花素馨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by txq0937 at 2012-11-19 14:31:53
我们做的实验,都是质粒线性化过后转的,效果不错

亲,你的实验操作能给我一份么,还有就是对质粒的要求是什么,
线性化以后,转化的效率好像明显不如环状的时候啊,唉
7楼2012-11-20 10:17:15
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花素馨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by linxt2005 at 2012-11-19 14:45:23
请教一下各位虫友,酿酒酵母与毕赤酵母转化及表达测试的方法类似吗?
目前只做过毕赤酵母的,还没有尝试过酿酒酵母,了解一下。

好像不太一样的,针对毕赤酵母很著名很成熟的一款质粒,ppic9K,但是酿酒酵母就没有这样类似的同源重组表达载体,唉
8楼2012-11-20 10:18:36
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chs4502

金虫 (小有名气)

期待大神的出现啊。。。
9楼2012-11-20 10:42:30
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