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xuanchen001

银虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体 原核表达

原核表达,以包涵体形式表达的蛋白质没有活性,怎么检测就是自己的目的蛋白,Western-Blot行吗?
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:54:30
xuanchen001: 金币+2 2012-11-19 20:54:07
xuanchen001: 回帖置顶 2012-11-19 20:54:59
我觉得可能得分两个方面来看待楼主的这个问题:
1. 检测表达的蛋白是否为目的蛋白,如楼上所言的,可以通过表达中对比阴性对照来判断及WB检测,WB最好用特异抗体,同时表达产物无须溶解,直接电泳就好了;
2. 若是目的是想了解其活性,那么则需要经过变、复性的过程,这个比较复杂。WB检测的蛋白是变性状态下,活性只能通过建立活性测试的方法来鉴定。
小兵一个
4楼2012-11-19 09:29:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:54:20
如果是在包涵体里,说明蛋白量应该很多,直接跑SDS-PAGE检查诱导后样品中比诱导前增加的蛋白条带,分析分子量是否正确。如果有诱导蛋白上加了标签或者有蛋白特异性抗体,可以做Western。
2楼2012-11-19 05:46:37
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lishg1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也可以用盐酸胍或尿素将其溶解后进一步鉴定,祝实验顺利
3楼2012-11-19 08:12:36
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