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xuanchen001

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[求助] 包涵体原核表达

原核表达，以包涵体形式表达的蛋白质没有活性，怎么检测就是自己的目的蛋白，Western-Blot行吗？

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1楼 2012-11-18 20:24:55

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linxt2005

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:54:30
xuanchen001: 金币+2 2012-11-19 20:54:07
xuanchen001: 回帖置顶 2012-11-19 20:54:59

我觉得可能得分两个方面来看待楼主的这个问题：
1. 检测表达的蛋白是否为目的蛋白，如楼上所言的，可以通过表达中对比阴性对照来判断及WB检测，WB最好用特异抗体，同时表达产物无须溶解，直接电泳就好了；
2. 若是目的是想了解其活性，那么则需要经过变、复性的过程，这个比较复杂。WB检测的蛋白是变性状态下，活性只能通过建立活性测试的方法来鉴定。