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sys0610

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNA提取问题

很多说明书和提RNA注意事项上都写着新鲜样品必须经液氮处理后再放-80℃,如果直接放-80℃会有什么后果?我准备提取RNA的样品,9月份从田里收回来,没有经液氮处理,直接冷冻在-80℃冰箱了。现在在做总RNA提取,可是不是降解就是没有带,最多两条带,用RNAiso Plus也试了,用试剂盒也试了,提了很多次都没有成功。不知和没有经液氮处理有没有关系~新手~~请各位指教~谢谢~
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
液氮速冻就是让材料以最快的速度冻好,可以减少组织破坏和RNA降解。不速冻的材料也可以提RNA,只是质量有可能不如速冻的好。最后RNA质量的好坏可能还有提取步骤的问题。
2楼2012-11-17 13:40:03
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云

【答案】应助回帖


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sys0610: 金币+1, 谢谢回复~ 2012-12-03 10:57:00
RNA酶无处不在,是不是某个过程中器皿什么的,在过了DEPC水之后,再次接触RNA酶了…
再者,楼主做的是植物样吧?
动物样一般是现场采集,过DEPC水,标记好,装入液氮罐,用前取适量液氮、研钵,迅速研碎之类。
锤之千古
3楼2012-11-17 20:09:24
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yyll1988

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sys0610: 金币+1, 谢谢回复~ 2012-12-03 10:57:14
楼主,确定做好准备工作了吗?并且操作也没有问题吗? 该泡得,该烘的或是该烧的,试剂都没有被污染?还有就是操作的手法也正确?
4楼2012-11-17 21:09:33
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