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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA提取问题
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sys0610

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNA提取问题

很多说明书和提RNA注意事项上都写着新鲜样品必须经液氮处理后再放-80℃，如果直接放-80℃会有什么后果？我准备提取RNA的样品，9月份从田里收回来，没有经液氮处理，直接冷冻在-80℃冰箱了。现在在做总RNA提取，可是不是降解就是没有带，最多两条带，用RNAiso Plus也试了，用试剂盒也试了，提了很多次都没有成功。不知和没有经液氮处理有没有关系~新手~~请各位指教~谢谢~
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1楼2012-11-17 11:51:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
液氮速冻就是让材料以最快的速度冻好，可以减少组织破坏和RNA降解。不速冻的材料也可以提RNA，只是质量有可能不如速冻的好。最后RNA质量的好坏可能还有提取步骤的问题。
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2楼2012-11-17 13:40:03
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sys0610: 金币+1, 谢谢回复~ 2012-12-03 10:57:00
RNA酶无处不在，是不是某个过程中器皿什么的，在过了DEPC水之后，再次接触RNA酶了…
再者，楼主做的是植物样吧？
动物样一般是现场采集，过DEPC水，标记好，装入液氮罐，用前取适量液氮、研钵，迅速研碎之类。
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锤之千古
3楼2012-11-17 20:09:24
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yyll1988

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sys0610: 金币+1, 谢谢回复~ 2012-12-03 10:57:14
楼主，确定做好准备工作了吗？并且操作也没有问题吗？ 该泡得，该烘的或是该烧的，试剂都没有被污染？还有就是操作的手法也正确？
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4楼2012-11-17 21:09:33
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