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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 线粒体内膜蛋白 转定位表达在细胞膜上
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320080920001

金虫 (正式写手)

[求助] 线粒体内膜蛋白 转定位表达在细胞膜上

大家好，最近有个非常急的问题，我想把一个线粒体内膜定位的蛋白（metabolite carrier）转定位到细胞膜上，然后我问了很多人，都说什么cut掉自己的信号肽，加上细胞膜定位的信号肽就行了，但是真的不行。
这个蛋白的信号肽定位在蛋白中间 首先不知道在哪些氨基酸上面 其次如果突变怕影响膜蛋白结构和转运功能
还有 根本就查不到真核蛋白的信号肽
不知道有经验的虫友有没有知道哪些比较经常用的细胞膜定位的信号肽吗？（最主要的问题，重要！）
还有如果我想把GFP连接到这个蛋白后面，是不是应该把信号肽连接在GFP后面啊？
请问用什么表达载体呢？我想构建稳定细胞系。
克隆这个蛋白的时候是克隆CDS还是克隆mRNA（比较CDS多了3‘UTR和5’UTR）？
非常感谢啊！
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1楼 2012-11-01 22:34:40
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320080920001

金虫 (正式写手)
顶上去
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2楼2012-11-02 19:31:38
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原有信号肽不管在什么地方，都要去掉。
GcFP要放在信号肽之后，可以在成熟蛋白前或后。
克隆CDS。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学无止境！
3楼2012-11-03 08:04:35
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320080920001

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yyk81 at 2012-11-03 08:04:35
原有信号肽不管在什么地方，都要去掉。
GcFP要放在信号肽之后，可以在成熟蛋白前或后。
克隆CDS。

但是就像我说的 这一类蛋白没有固定的信号肽 如果去掉的话就没有几个氨基酸剩下了 还有如果比方说信号肽放到GFP之前的话 岂不是导致信号肽起不到作用吗， 而且信号肽剪切的时候 GFP也被剪切下来了
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4楼2012-11-03 16:00:00
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320080920001

金虫 (正式写手)
据我所知， 有些载体可以表达CDS，有些载体却要求表达mRNA， 即对UTR部分也有需求。但是不知详情啊。
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5楼2012-11-03 16:01:02
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320080920001

金虫 (正式写手)
顶一下
6楼2012-11-14 17:49:35
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lioboo

铁虫 (正式写手)
楼主的实验做成之后可获诺奖
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死生挈阔与子同悦，执子之手与子偕老
7楼2012-11-14 21:25:57
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320080920001

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lioboo at 2012-11-14 21:25:57
楼主的实验做成之后可获诺奖

这是反讽吗？我只是实验需要而已罢了 不是在这无病呻吟折磨大家也折磨自己啊！
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8楼2012-11-15 23:59:39
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lioboo

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 320080920001 at 2012-11-15 23:59:39
这是反讽吗？我只是实验需要而已罢了 不是在这无病呻吟折磨大家也折磨自己啊！...

我绝对没那个意思，我只是觉得这个实验非常有意义，难度也很大，激励一下楼主而已
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死生挈阔与子同悦，执子之手与子偕老
9楼2012-11-16 08:01:58
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320080920001

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lioboo at 2012-11-16 08:01:58
我绝对没那个意思，我只是觉得这个实验非常有意义，难度也很大，激励一下楼主而已...

哦 那谢谢了
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10楼2012-11-16 22:38:27
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