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几丁质酶活性测定-问题
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我做的试验是：《产几丁质酶土壤放线菌》，现在已找出5种几丁质平板透明圈较大菌种，进行摇瓶发酵，DN法S测酶活，但测了两批，结果对照和样品吸光度值几乎相同，甚至还低，请问哪出了问题？ 试验大体步骤： 1.打孔菌株摇床发酵（培养液：几丁质胶体2%，酵母膏0.5%，蛋白胨0.5%，无机盐），30度180rpm培养3-9天； 2.取发酵液1.5ml，5000rpm离心5min,取上清1.0ml加入1.5ml离心管，再加入0.1ml1%胶体几丁质和0.1mPH6.0磷酸缓冲液，45度水浴120min（对照直接沸水浴灭活10min）,然后迅速灭活，15000rpm离心10min； 3.取上清1.0ml加入20ml试管，再加入1.5mlDNS和1.0ml蒸馏水，沸水浴10min,后迅速冷却，补足蒸馏水至8ml，放置20分钟后，测值。 补充：葡萄糖标准曲线没问题。 |
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