应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 475  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化 已有2人参与

我的目的蛋白在组氨酸标签，纯化用的是亲和柱，但是做SDS，上样前后没有变化，基本确定蛋白没挂在柱子上，求帮助。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-10-30 10:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 16:00:57
你的蛋白是上清表达吧
这种情况下，你调整你的样品缓冲液的PH值和增减离子强度会起到效果。
不知道你具体的实验条件，只能给你这些建议
如果还没解决我再给你其他的办法
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-10-30 11:18:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 16:01:06
首先确定你的破菌Buffer是否合适，PH，盐离子浓度等等。
如果没有问题那么就怀疑是否His标签被蛋白包被在里面，所以才挂不上柱子。这样的话，就要在养菌的时候降低温度，或者尝试加点尿素使His标签露出来。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-10-30 14:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-10-30 11:18:09
你的蛋白是上清表达吧
这种情况下，你调整你的样品缓冲液的PH值和增减离子强度会起到效果。
不知道你具体的实验条件，只能给你这些建议
如果还没解决我再给你其他的办法

样品缓冲液的PH值和增减离子强度 能具体一点说吗，
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-30 16:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-10-30 14:00:21
首先确定你的破菌Buffer是否合适，PH，盐离子浓度等等。
如果没有问题那么就怀疑是否His标签被蛋白包被在里面，所以才挂不上柱子。这样的话，就要在养菌的时候降低温度，或者尝试加点尿素使His标签露出来。

我加IPTG诱导表达，目的蛋白分子量5000左右，而SDS显示10000左右，纯化的时侯又挂不上柱子
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-30 16:18:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:09:26
首先的是在你的目前纯化缓冲液上下功夫
如果你的缓冲液是PBS，那么可以尝试去掉其中的高浓度NaCl，或是再提高盐离子浓度。PH值也可以尝试。
其次，如果你的目的蛋白在后续的检测中没有特别的要求的话，如样品溶液中不能有脲素或其他的表面活性剂的话
就可以采用向其中加脲素或其他的表面活性剂。
这2个方法看你的实验要求
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-10-31 08:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-30 16:18:23
我加IPTG诱导表达，目的蛋白分子量5000左右，而SDS显示10000左右，纯化的时侯又挂不上柱子...

10000左右？你的蛋白不会是聚合了吧？介意可以尝试跑一个非变性胶看看~
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-31 08:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxh502976898 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 276求调剂 +3 赵久华 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 调剂申请 +5 张张张张zy 2026-03-31 5/250 2026-03-31 10:00 by 芦铭1998
[考博] 材料专业申博 +4 杜雨婷dyt 2026-03-29 4/200 2026-03-31 07:20 by 明海天涯
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 11408总分309，一志愿东南大学求调剂，不挑专业 +5 天赋带到THU 2026-03-29 6/300 2026-03-30 20:49 by dick_runner
[考研] 105500药学求调剂，一志愿山东大学药学，348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 296求调剂 +10 彼岸t 2026-03-29 10/500 2026-03-30 10:50 by 探123
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +4 丢掉懒惰 2026-03-27 7/350 2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 机械学硕310分，数一英一，一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭