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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白纯化 已有2人参与

我的目的蛋白在组氨酸标签,纯化用的是亲和柱,但是做SDS,上样前后没有变化,基本确定蛋白没挂在柱子上,求帮助。。。。
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:09:26
首先的是在你的目前纯化缓冲液上下功夫
如果你的缓冲液是PBS,那么可以尝试去掉其中的高浓度NaCl,或是再提高盐离子浓度。PH值也可以尝试。
其次,如果你的目的蛋白在后续的检测中没有特别的要求的话,如样品溶液中不能有脲素或其他的表面活性剂的话
就可以采用向其中加脲素或其他的表面活性剂。
这2个方法看你的实验要求
6楼2012-10-31 08:34:38
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 16:00:57
你的蛋白是上清表达吧
这种情况下,你调整你的样品缓冲液的PH值和增减离子强度会起到效果。
不知道你具体的实验条件,只能给你这些建议
如果还没解决我再给你其他的办法
2楼2012-10-30 11:18:09
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gelois

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-30 16:01:06
首先确定你的破菌Buffer是否合适,PH,盐离子浓度等等。
如果没有问题那么就怀疑是否His标签被蛋白包被在里面,所以才挂不上柱子。这样的话,就要在养菌的时候降低温度,或者尝试加点尿素使His标签露出来。
3楼2012-10-30 14:00:21
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-10-30 11:18:09
你的蛋白是上清表达吧
这种情况下,你调整你的样品缓冲液的PH值和增减离子强度会起到效果。
不知道你具体的实验条件,只能给你这些建议
如果还没解决我再给你其他的办法

样品缓冲液的PH值和增减离子强度 能具体一点说吗,
4楼2012-10-30 16:16:11
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