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红虫梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相纯化包涵体蛋白

各位同仁,本人想用高效液相色谱纯化8M urea溶解的蛋白质,但是不知道蛋白质会不会在过柱子的时候沉淀,毕竟流动相是乙腈和水的混合体,望高手指教。谢谢!
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梦想
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你只是让包涵体变性了,但是流动相中是没有尿素的,可能蛋白会复性,不好的一部分可能没法重新折叠,
从而导致沉淀。
2楼2012-10-26 09:44:59
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红虫梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:44:59
你只是让包涵体变性了,但是流动相中是没有尿素的,可能蛋白会复性,不好的一部分可能没法重新折叠,
从而导致沉淀。

那应该会损坏柱子和检测器吧?
梦想
3楼2012-10-26 10:47:32
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-10-26 10:47:32
那应该会损坏柱子和检测器吧?...

可能会堵塞管路还有柱子的。
4楼2012-10-26 11:07:55
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-10-26 10:47:32
那应该会损坏柱子和检测器吧?...

包涵体纯化没必要用有机流动相,你可以用FPLC,用含尿素的流动相纯化,过Q什么的。
5楼2012-10-26 11:09:32
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