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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高效液相纯化包涵体蛋白
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红虫梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相纯化包涵体蛋白

各位同仁，本人想用高效液相色谱纯化8M urea溶解的蛋白质，但是不知道蛋白质会不会在过柱子的时候沉淀，毕竟流动相是乙腈和水的混合体，望高手指教。谢谢！
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梦想
1楼 2012-10-26 08:49:06
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你只是让包涵体变性了，但是流动相中是没有尿素的，可能蛋白会复性，不好的一部分可能没法重新折叠，
从而导致沉淀。
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2楼2012-10-26 09:44:59
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红虫梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-10-26 09:44:59
你只是让包涵体变性了，但是流动相中是没有尿素的，可能蛋白会复性，不好的一部分可能没法重新折叠，
从而导致沉淀。

那应该会损坏柱子和检测器吧?
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梦想
3楼2012-10-26 10:47:32
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-10-26 10:47:32
那应该会损坏柱子和检测器吧?...

可能会堵塞管路还有柱子的。
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4楼2012-10-26 11:07:55
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-10-26 10:47:32
那应该会损坏柱子和检测器吧?...

包涵体纯化没必要用有机流动相，你可以用FPLC，用含尿素的流动相纯化，过Q什么的。
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5楼2012-10-26 11:09:32
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