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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 6孔板内部细胞堆积,周围形成空白区域

种植到6孔板内细胞,堆积在一起,成为团块状,形成空白区域,该空白区域内细胞极其稀少或者没有。细胞团块与空白区域间界限明显。
培养基澄清,没有沉淀,孔板底部可看到明显的诸多白色斑点(也就是细胞聚团)和空白区域。
但是,同一批的细胞在培养瓶里的则生长正常。
我感觉可能是我细胞没有充分吹散,导致部分区域细胞密度过大,堆积而形成的。
请问各位亲,觉得是怎么回事??难道是污染吗?

[ Last edited by bjgymilyxz on 2012-10-20 at 16:43 ]
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2012-10-21 07:59:00
bjgymilyxz: 金币+2, 有帮助 2012-10-22 18:05:30
原因1:有可能是板子底部没处理好,建议换个品牌的多孔板试试,特别是BD、corning或costar较好。原因2:消化不充分,导致吹不开,建议消化和吹悬更彻底些;原因3:培养室里超净台/生物安全柜与培养箱之间有较长距离,你端平板走路时习惯左右摇摆,圆形培育孔容易受圆周震荡影响,细胞像院子里风吹落叶一样在中间堆积,密度过大贴壁不牢,边缘则缺少细胞,方形培养瓶底会好得多。建议:改用平推车运平板或在放入培养箱前再彻底摇匀一次。找到原因对症下药,应该不是细胞本身的问题。
3楼2012-10-20 22:51:06
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普通回帖

水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-21 07:58:37
两个可能,一个是细胞板的问题,换一块6孔板或者换一家的6孔板试试,另一个,细胞吹散铺板之后,将6孔板8字操作摇匀之后再培养试试。
2楼2012-10-20 17:43:43
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王清洪

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-22 06:18:03
堆积的原因估计是铺的明胶有问题,还有板子问题,大部分是没铺匀的原因。
4楼2012-10-21 09:45:02
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shaoxin816

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-22 06:18:10
细胞死了之后就会聚集成团吧,应该不是吹打不充分的原因,或者是你没有充分晃匀。。。。
5楼2012-10-21 21:29:56
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by shaoxin816 at 2012-10-21 21:29:56
细胞死了之后就会聚集成团吧,应该不是吹打不充分的原因,或者是你没有充分晃匀。。。。

细胞没有死。聚团周围没有细胞,呈现空白
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6楼2012-10-22 17:46:18
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jzhwang2007 at 2012-10-20 22:51:06
原因1:有可能是板子底部没处理好,建议换个品牌的多孔板试试,特别是BD、corning或costar较好。原因2:消化不充分,导致吹不开,建议消化和吹悬更彻底些;原因3:培养室里超净台/生物安全柜与培养箱之间有较长距离 ...

板子是BD的,应该质量还好吧,估计是没有充分吹散吧,还有,培养箱内可能不平。
移植入6孔板后,在室温下静置5-10分钟,然后显微镜观察发现,6孔板内某些区域细胞特别的密集或者有的孔整个都特别密,结果第2天观察时就发现细胞出现“太阳花式”的聚团,结团,周围细胞极其稀少。

后来又做了一批,充分吹散,移入,然后显微镜观察发现,6孔板内细胞分布尚可,只是某些孔仍分布不均,第2天观察有部分孔细胞呈聚团,结团的倾向,空白区域与有细胞区域形成明显的界限。
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7楼2012-10-22 17:55:53
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 王清洪 at 2012-10-21 09:45:02
堆积的原因估计是铺的明胶有问题,还有板子问题,大部分是没铺匀的原因。

重新做了一批,第2天观察仍有部分孔细胞出现聚团,结团的现象,细胞稀少区域与细胞铺满区域之间具有明显的空白界限。
是不是我植入细胞时操作有问题,我一般时先加入1mL DMEM到各个孔,摇晃孔板让DMEM覆盖整个孔,然后配制好细胞悬液,每孔加入0.5mL。但是,我加入细胞液,有时是从孔板的一侧加入,有时因为担心细胞分布不均,会沿着一个孔的上、下,左、右、正中依次加入。
不知道是不是因为后一种方法,细胞才出现聚团,结团的现象
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8楼2012-10-22 18:04:07
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天: 金币+3, 鼓励交流 常来 2012-10-25 19:03:06
1.5 ml 细胞悬液直接混匀加进去就行,不必横生枝节。再到BD网站核查一下你用的多孔板的编号,看它的底部是否已经过处理,这种处理是否符合你的需要。板子有很多类型,对应不同的用途,不都是适合养贴壁细胞的。
9楼2012-10-22 23:18:11
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jzhwang2007 at 2012-10-22 23:18:11
1.5 ml 细胞悬液直接混匀加进去就行,不必横生枝节。再到BD网站核查一下你用的多孔板的编号,看它的底部是否已经过处理,这种处理是否符合你的需要。板子有很多类型,对应不同的用途,不都是适合养贴壁细胞的。

不是说,先加入DMEM润湿孔板底部,有利于细胞均匀附着嘛。1.5mL细胞悬液直接加入会不会有的地方覆盖不到啊?我先加1mLDMEM的时候,孔板有的地方就由于液体表面张力而覆盖不到,需要晃动一下,才能让DMEM覆盖这个孔板
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10楼2012-10-24 09:31:50
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