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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 6孔板内部细胞堆积，周围形成空白区域
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 6孔板内部细胞堆积，周围形成空白区域

种植到6孔板内细胞，堆积在一起，成为团块状，形成空白区域，该空白区域内细胞极其稀少或者没有。细胞团块与空白区域间界限明显。
培养基澄清，没有沉淀，孔板底部可看到明显的诸多白色斑点（也就是细胞聚团）和空白区域。
但是，同一批的细胞在培养瓶里的则生长正常。
我感觉可能是我细胞没有充分吹散，导致部分区域细胞密度过大，堆积而形成的。
请问各位亲，觉得是怎么回事？？难道是污染吗？

[ Last edited by bjgymilyxz on 2012-10-20 at 16:43 ]
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1楼 2012-10-20 16:39:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2012-10-21 07:59:00
bjgymilyxz: 金币+2, ★有帮助 2012-10-22 18:05:30
原因1：有可能是板子底部没处理好，建议换个品牌的多孔板试试，特别是BD、corning或costar较好。原因2：消化不充分，导致吹不开，建议消化和吹悬更彻底些；原因3：培养室里超净台/生物安全柜与培养箱之间有较长距离，你端平板走路时习惯左右摇摆，圆形培育孔容易受圆周震荡影响，细胞像院子里风吹落叶一样在中间堆积，密度过大贴壁不牢，边缘则缺少细胞，方形培养瓶底会好得多。建议：改用平推车运平板或在放入培养箱前再彻底摇匀一次。找到原因对症下药，应该不是细胞本身的问题。
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3楼2012-10-20 22:51:06
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普通回帖

水寒冰006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-10-21 07:58:37
两个可能，一个是细胞板的问题，换一块6孔板或者换一家的6孔板试试，另一个，细胞吹散铺板之后，将6孔板8字操作摇匀之后再培养试试。
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2楼2012-10-20 17:43:43
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王清洪

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-22 06:18:03
堆积的原因估计是铺的明胶有问题，还有板子问题，大部分是没铺匀的原因。
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4楼2012-10-21 09:45:02
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shaoxin816

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-10-22 06:18:10
细胞死了之后就会聚集成团吧，应该不是吹打不充分的原因，或者是你没有充分晃匀。。。。
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5楼2012-10-21 21:29:56
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shaoxin816 at 2012-10-21 21:29:56
细胞死了之后就会聚集成团吧，应该不是吹打不充分的原因，或者是你没有充分晃匀。。。。

细胞没有死。聚团周围没有细胞，呈现空白
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6楼2012-10-22 17:46:18
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jzhwang2007 at 2012-10-20 22:51:06
原因1：有可能是板子底部没处理好，建议换个品牌的多孔板试试，特别是BD、corning或costar较好。原因2：消化不充分，导致吹不开，建议消化和吹悬更彻底些；原因3：培养室里超净台/生物安全柜与培养箱之间有较长距离 ...

板子是BD的，应该质量还好吧，估计是没有充分吹散吧，还有，培养箱内可能不平。
移植入6孔板后，在室温下静置5-10分钟，然后显微镜观察发现，6孔板内某些区域细胞特别的密集或者有的孔整个都特别密，结果第2天观察时就发现细胞出现“太阳花式”的聚团，结团，周围细胞极其稀少。

后来又做了一批，充分吹散，移入，然后显微镜观察发现，6孔板内细胞分布尚可，只是某些孔仍分布不均，第2天观察有部分孔细胞呈聚团，结团的倾向，空白区域与有细胞区域形成明显的界限。
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7楼2012-10-22 17:55:53
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王清洪 at 2012-10-21 09:45:02
堆积的原因估计是铺的明胶有问题，还有板子问题，大部分是没铺匀的原因。

重新做了一批，第2天观察仍有部分孔细胞出现聚团，结团的现象，细胞稀少区域与细胞铺满区域之间具有明显的空白界限。
是不是我植入细胞时操作有问题，我一般时先加入1mL DMEM到各个孔，摇晃孔板让DMEM覆盖整个孔，然后配制好细胞悬液，每孔加入0.5mL。但是，我加入细胞液，有时是从孔板的一侧加入，有时因为担心细胞分布不均，会沿着一个孔的上、下，左、右、正中依次加入。
不知道是不是因为后一种方法，细胞才出现聚团，结团的现象
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8楼2012-10-22 18:04:07
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
看天: 金币+3, 鼓励交流 常来 2012-10-25 19:03:06
1.5 ml 细胞悬液直接混匀加进去就行，不必横生枝节。再到BD网站核查一下你用的多孔板的编号，看它的底部是否已经过处理，这种处理是否符合你的需要。板子有很多类型，对应不同的用途，不都是适合养贴壁细胞的。
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9楼2012-10-22 23:18:11
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jzhwang2007 at 2012-10-22 23:18:11
1.5 ml 细胞悬液直接混匀加进去就行，不必横生枝节。再到BD网站核查一下你用的多孔板的编号，看它的底部是否已经过处理，这种处理是否符合你的需要。板子有很多类型，对应不同的用途，不都是适合养贴壁细胞的。

不是说，先加入DMEM润湿孔板底部，有利于细胞均匀附着嘛。1.5mL细胞悬液直接加入会不会有的地方覆盖不到啊？我先加1mLDMEM的时候，孔板有的地方就由于液体表面张力而覆盖不到，需要晃动一下，才能让DMEM覆盖这个孔板
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10楼2012-10-24 09:31:50
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