应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » α-淀粉酶基因表达问题
81/1返回列表
查看: 1092  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] α-淀粉酶基因表达问题

各位虫友，本人最近在做α-淀粉酶基因的表达，遇到了如下问题：
(1)表达载体为PET-28a，表达宿主菌为BL21，外源基因已经通过测序验证连接到载体上了，检测酶活是发现，发酵液中有酶活但是胞内没有酶活，这是怎么回事呢？按理说应该是表达在胞内的呀?
(2)空白对照（JM109含有空载体）的发酵液中也有酶活？？？
ps：我都用IPTG诱导的，是不是说明菌种本身就能表达这种淀粉酶呢？
都要愁死了。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-17 21:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1)淀粉酶当然可以分泌到胞外。2）你查一下BL21的基因组序列，看看有没有淀粉酶基因，一般细菌都会有淀粉酶基因的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-18 08:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-10-18 08:24:45
1)淀粉酶当然可以分泌到胞外。2）你查一下BL21的基因组序列，看看有没有淀粉酶基因，一般细菌都会有淀粉酶基因的。

是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢？pET28是胞内表达型的载体啊。。。如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话，那我这个基因表达真就没办法做了呀。。。
求助。。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-18 09:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-18 18:43:59
是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢？Re: 不是载体决定的，是由微生物本身是否有淀粉酶向胞转运系统决定的。
如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话，那我这个基因表达真就没办法做了呀。Re：你表达这个淀粉酶到底想做什么？否则没法给你建议啊。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-18 10:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-10-18 10:46:13
是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢？Re: 不是载体决定的，是由微生物本身是否有淀粉酶向胞转运系统决定的。
如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话，那我这个基因表达真就没办 ...

我是从微生物里面P出了淀粉酶的基因，然后连接到pET-28载体上进行表达，研究酶性质，并进行定点突变的，你看看有什么问题。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-18 19:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-19 07:43:17
宿主菌胞内一点没有淀粉酶活力也说不过去，换其它E. coli试试。至于你说的宿主菌自生表达淀粉酶问题倒不大，毕竟酶蛋白的分子量不可能完全一样，可以分离的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-18 21:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-10-18 10:46:13
是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢？Re: 不是载体决定的，是由微生物本身是否有淀粉酶向胞转运系统决定的。
如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话，那我这个基因表达真就没办 ...

载体也可以决定滴
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-19 17:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 狐狸尾巴 at 2012-10-19 17:07:20
载体也可以决定滴...

那我出现这样的状况到底说明是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-20 07:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuyan_1215 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂（0805） +6 烟汐忆海 2026-03-16 16/800 2026-03-19 00:59 by 烟汐忆海
[考研] 求材料调剂 +8 隔壁陈先生 2026-03-12 8/400 2026-03-18 22:19 by li123456789.
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 274求调剂 +5 S.H1 2026-03-18 5/250 2026-03-18 21:27 by guosr9609
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +10 yangfz 2026-03-17 10/500 2026-03-18 20:14 by walc
[考研] 314求调剂 +8 无懈可击的巨人 2026-03-12 8/400 2026-03-18 14:50 by haxia
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +10 曦熙兮 2026-03-15 10/500 2026-03-18 14:19 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭