24小时热门版块排行榜    

查看: 1087  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] α-淀粉酶基因表达问题

各位虫友,本人最近在做α-淀粉酶基因的表达,遇到了如下问题:
(1)表达载体为PET-28a,表达宿主菌为BL21,外源基因已经通过测序验证连接到载体上了,检测酶活是发现,发酵液中有酶活但是胞内没有酶活,这是怎么回事呢?按理说应该是表达在胞内的呀?
(2)空白对照(JM109含有空载体)的发酵液中也有酶活???
ps:我都用IPTG诱导的,是不是说明菌种本身就能表达这种淀粉酶呢?
都要愁死了。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-10-18 10:46:13
是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢?Re: 不是载体决定的,是由微生物本身是否有淀粉酶向胞转运系统决定的。
如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话,那我这个基因表达真就没办 ...

我是从微生物里面P出了淀粉酶的基因,然后连接到pET-28载体上进行表达,研究酶性质,并进行定点突变的,你看看有什么问题。
5楼2012-10-18 19:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1)淀粉酶当然可以分泌到胞外。2)你查一下BL21的基因组序列,看看有没有淀粉酶基因,一般细菌都会有淀粉酶基因的。
2楼2012-10-18 08:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-10-18 08:24:45
1)淀粉酶当然可以分泌到胞外。2)你查一下BL21的基因组序列,看看有没有淀粉酶基因,一般细菌都会有淀粉酶基因的。

是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢?pET28是胞内表达型的载体啊。。。如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话,那我这个基因表达真就没办法做了呀。。。
求助。。。
3楼2012-10-18 09:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-18 18:43:59
是否可以分泌到胞外是表达载体决定的还是本身的目的基因决定的呢?Re: 不是载体决定的,是由微生物本身是否有淀粉酶向胞转运系统决定的。
如果像BL21这样的通用型宿主都能表达淀粉酶的话,那我这个基因表达真就没办法做了呀。Re:你表达这个淀粉酶到底想做什么?否则没法给你建议啊。
4楼2012-10-18 10:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +4 阳阳哇塞 2026-03-14 8/400 2026-03-18 12:43 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 307求调剂 +3 冷笙123 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:55 by macy2011
[考研] 材料专硕306英一数二 +9 z1z2z3879 2026-03-16 12/600 2026-03-18 08:53 by zhukairuo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么! 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见