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cmzither

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于氧电极测放氧活性

请问各位有没有用过氧电极测光系统2的放氧活性呢？我最近做了好几次，都没有成功，想请教各位，空气线跑的挺好，就是加了样品之后，出来的都是直线，接近0 ，请问有谁知道原因，指导指导下，谢谢啊~~我们的氧电极是缺了个盖子的，我们测样品时用别的东西把口堵住。拜托各位了~~❀O(∩_∩)O谢谢~
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1楼 2012-10-17 13:41:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cmzither: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-10-19 20:49:58
确定样品浓度是不是够。你是做薇藻，叶绿体还是内囊体膜？根据不同材料和活性，样品的叶绿素浓度在5-20ug不等。你是否加了合适浓度的的电子受体？测PSII一般用DCBQ或者DMBQ. 加电子受体后是否立即照光测定？因为这些受体对样品有破坏作用，加时间长了活性会很低。你测定所用光强是多少，是否是饱和光强又不是太强引起迅速的光抑制。你测定的缓冲液pH是多少？
还有就是你是否校准了你的氧电极？每次安好膜后要用饱和含氧量和0含氧量校准，否则测出的数据无可比性。
如果你确了盖子有些问题，数据可能不准，但不影响测定。因为那个特定的盖子是为了使样品室和大气联通（保障反应是在1个大气压下进行），但又阻碍样品室和空气中氧气的迅速交换，形成一个相对独立的空间。
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cmzither
2楼2012-10-18 08:59:23
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cmzither

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 08:59:23
确定样品浓度是不是够。你是做薇藻，叶绿体还是内囊体膜？根据不同材料和活性，样品的叶绿素浓度在5-20ug不等。你是否加了合适浓度的的电子受体？测PSII一般用DCBQ或者DMBQ. 加电子受体后是否立即照光测定？因为这些 ...

样品浓度为10μg/ml，我做的是类囊体膜。没有加DCBQ和DMBQ。加的是对苯二胺和铁氰化钾。加完反应液后加样品然后盖“盖子”之后就开始开光照和转子。测定光强为500，缓冲液pH为6.8.
前面跑的三条空气线挺稳定。
就是样品线总是像一条直线。。。。。
O(∩_∩)O谢谢~
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3楼2012-10-19 09:54:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cmzither at 2012-10-19 09:54:14
样品浓度为10μg/ml，我做的是类囊体膜。没有加DCBQ和DMBQ。加的是对苯二胺和铁氰化钾。加完反应液后加样品然后盖“盖子”之后就开始开光照和转子。测定光强为500，缓冲液pH为6.8.
前面跑的三条空气线挺稳定。
就 ...

铁氰化钾好像不能穿过叶绿体膜，你的内囊体膜是怎么制备的？是先分出叶绿体组分再shock吗？会不会是电子受体没有穿透呢？此外，铁氰化钾好像不是PSII专一的电子受体，为什么不用醌类呢？还有，不知道你做什么植物，光强500好像没有饱和吧。
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4楼2012-10-19 10:18:57
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cmzither

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 10:18:57
铁氰化钾好像不能穿过叶绿体膜，你的内囊体膜是怎么制备的？是先分出叶绿体组分再shock吗？会不会是电子受体没有穿透呢？此外，铁氰化钾好像不是PSII专一的电子受体，为什么不用醌类呢？还有，不知道你做什么植物， ...

我们是用菠菜的类囊体，就是将叶片在缓冲液中捣碎，然后过滤离心，接着在涨破液中匀浆再离心，上清再离心得到的沉淀就是类囊体了。我们试过将光强设为800的，但是结果还是那样，哎，愁~~~都已经反反复复做了快10次了，出来了试剂没有换，其他的条件都改变过。但是，用铁氰化钾这种方法有个师兄是做过的，不过他做的是小麦的而已。
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5楼2012-10-19 20:49:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cmzither at 2012-10-19 20:49:10
我们是用菠菜的类囊体，就是将叶片在缓冲液中捣碎，然后过滤离心，接着在涨破液中匀浆再离心，上清再离心得到的沉淀就是类囊体了。我们试过将光强设为800的，但是结果还是那样，哎，愁~~~都已经反反复复做了快10次 ...

你有没有避光保存铁氰化钾，而且存放时间有限，最好不要配很多。不知道是不是铁氰化钾不好了。
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cmzither
6楼2012-10-20 06:51:40
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cmzither

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:51:40
你有没有避光保存铁氰化钾，而且存放时间有限，最好不要配很多。不知道是不是铁氰化钾不好了。...

嗯嗯，我们的实验都是在弱光的条件下进行的，铁氰化钾基本上是现配现用。谢谢你啊~~我过两天再试试看。谢谢谢谢谢O(∩_∩)O谢谢~~
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7楼2012-10-20 21:20:03
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