应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建GFP融合基因时，如何设计带限制性内切酶的引物
31/1返回列表
查看: 1064  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

stonesby

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建GFP融合基因时，如何设计带限制性内切酶的引物

构建GFP融合基因，目的基因放GFP前面，需要去除终止密码子，具体如何去除？带限制性内切酶的引物如何设计？新手刚接触，请指教，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-10 10:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-10-10 16:29:34
1949stone: MolEPI+1, 很有指导意义 2012-10-10 16:29:53
如果你是手动设计引物就直接将终止密码子去掉，然后在终止密码子前面选取18-21个碱基，再反向互补就是下游引物了。将选择好的内切酶（既要保证能切下来还要能连接上去）加上保护碱基直接放到设计好的引物序列上就OK了。切记方向不要弄反了！
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-10 10:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

stonesby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-10 10:40:47
如果你是手动设计引物就直接将终止密码子去掉，然后在终止密码子前面选取18-21个碱基，再反向互补就是下游引物了。将选择好的内切酶（既要保证能切下来还要能连接上去）加上保护碱基直接放到设计好的引物序列上就OK ...

非常感谢，不过能否再进一步教授下，
1.为什么选取18-21个碱基？不是更多或者更少
2.如何选择内切酶?我要的基因是细胞膜蛋白，选的载体是pEGFP-N系列（N1,N2,N3,不知道选哪个）上面的多酶切位点有好多内切酶..
3.‘切记方向不要弄反了’是指保护碱基加的位置吗？
刚入门，望老手指点下，解答疑惑，这比自己去找资料更好吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-20 09:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stonesby 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭