应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建GFP融合基因时，如何设计带限制性内切酶的引物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 1021  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

stonesby

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建GFP融合基因时，如何设计带限制性内切酶的引物

构建GFP融合基因，目的基因放GFP前面，需要去除终止密码子，具体如何去除？带限制性内切酶的引物如何设计？新手刚接触，请指教，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-10 10:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-10-10 16:29:34
1949stone: MolEPI+1, 很有指导意义 2012-10-10 16:29:53
如果你是手动设计引物就直接将终止密码子去掉，然后在终止密码子前面选取18-21个碱基，再反向互补就是下游引物了。将选择好的内切酶（既要保证能切下来还要能连接上去）加上保护碱基直接放到设计好的引物序列上就OK了。切记方向不要弄反了！
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-10 10:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

stonesby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-10 10:40:47
如果你是手动设计引物就直接将终止密码子去掉，然后在终止密码子前面选取18-21个碱基，再反向互补就是下游引物了。将选择好的内切酶（既要保证能切下来还要能连接上去）加上保护碱基直接放到设计好的引物序列上就OK ...

非常感谢，不过能否再进一步教授下，
1.为什么选取18-21个碱基？不是更多或者更少
2.如何选择内切酶?我要的基因是细胞膜蛋白，选的载体是pEGFP-N系列（N1,N2,N3,不知道选哪个）上面的多酶切位点有好多内切酶..
3.‘切记方向不要弄反了’是指保护碱基加的位置吗？
刚入门，望老手指点下，解答疑惑，这比自己去找资料更好吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-20 09:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 stonesby 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +8 zyx上岸！ 2026-04-04 8/400 2026-04-05 23:08 by lbsjt
[考研] 求调剂 +7 张zic 2026-04-05 8/400 2026-04-05 22:57 by Hdyxbekcb
[考研] 生物与医药273求调剂 +5 荔题南墙 2026-04-05 5/250 2026-04-05 22:04 by imissbao
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +12 路痴小琪 2026-04-05 12/600 2026-04-05 21:50 by 醉翁wl
[考研] 材料调剂 +7 一样YWY 2026-04-05 8/400 2026-04-05 21:20 by 学员8dgXkO
[考研] 085602调剂 初试总分335 +8 19123253302 2026-04-05 8/400 2026-04-05 20:44 by 南航~万老师
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +16 小黄鸭宝 2026-03-30 16/800 2026-04-03 19:53 by lijunpoly
[考研] 336求调剂 +8 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-03 19:41 by lijunpoly
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358 +4 cs0106 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:41 by 百灵童888
[考研] 313求调剂 +3 ～微微凉～ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 化学工程专硕324分，一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭