应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额
61/1返回列表
查看: 1218  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

牛圈圈

铜虫 (初入文坛)

[求助] 马上要开始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神帮忙看看实验步骤有木有啥致命问题额

将100ml培养液（LB培养）转移至离心管中，12000rpm离心5min，弃上清。
2. 加入9.5mlTE悬浮沉淀，并加0.5ml10%SDS。混匀37℃保温1小时。
3. 加1.5ml 5mol/LNaCl，混匀。
4. 加1.5m CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20分钟。
5. 用等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm离心10分钟，将上清液移至干净离心管。
6. 用等体积异戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rpm离心10分钟，取上清液移至干净管中。
7. 加入0.6-1倍体积异丙醇，-20℃静置30min.
8. 12000rpm离心10min弃上清。
9. 将沉淀悬浮于10ml超纯水中。
10. 加入等体积饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），上下颠倒数次混匀。
11. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。
12. 加入等体积饱和氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒数次混匀。
13. 12000rpm离心10min,吸取上相液体。
14. 加入1/10体积3M NaAc，在加入2倍体积预冷的无水乙醇，-20℃放置30min.
15. 12000rpm离心15min,弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀。
16. 自然风干后，加入1-2mlTE或者超纯水溶解DNA。

大神们，现在实验室条件有限，我想着都用10000rpm多转一会儿，不知道可行不？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-02 20:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
应该是可以的
回复此楼
2楼2012-10-02 22:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1万转足够，无需增加时间。
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-04 08:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
牛圈圈: 金币+2 2012-10-04 16:41:16
第7步中，加0.6体积的异丙醇室温放置30min，第14步-20放置1h左右比较好。另外尽量用12000，转速达不到，加长时间是没用的，转速12000分离效果比较好！！！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-10-04 10:55:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
乳酸菌一般要用MRS培养基，LB培养基营养成分不足，很难长起来。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-05 09:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牛圈圈

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by scienzyme at 2012-10-05 09:46:57
乳酸菌一般要用MRS培养基，LB培养基营养成分不足，很难长起来。

很感谢~提醒得很及时呢~嘿嘿~
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-09 15:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 牛圈圈 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +5 Losir 2026-03-12 6/300 2026-03-17 10:01 by 求调剂zz
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 301求调剂 +3 A_JiXing 2026-03-16 3/150 2026-03-17 08:21 by 无际的草原
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭