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zhaoyu2881

木虫 (正式写手)

[求助] 基因插入突变的一点疑惑？

第一次着手做插入突变，打算将目的基因（~1kb）插入到质粒pBS的MCS中，然后插入抗性基因使其失活。现在有个疑惑，所要插入的目的基因需要是全长吗，还是基因的一部分也可以？现用实验室现有的引物扩增出大概850-900bp的片段，我不知道是否需要重新设计引物扩出全长，然后再做插入突变？

第一次做insertion mutant，不是很懂，希望有经验的虫虫们不吝指教~~谢谢！
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Thatislife,onlylifehurts.
1楼 2012-09-28 02:18:28
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zhaoyu2881

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-28 14:16:28
你是说你要失活的基因里面正好有一个酶切位点，可以用于插入抗性基因？这样的话就简单了，你直接PCR出一段你的目的基因，让那个酶切位点在中间，克隆到任何克隆载体的CMS，然后插入抗性基因。如果你是做失活，而且 ...

恩，是呢，是打算像你说的这样做呢。我只是现在担心，如果P出来的基因不是全长，会不会在抗性基因插入失活之前，我的目的片段就已经不是功能基因了，那到最后转化到宿主后，岂不是不能说明是因为插入而引起的失活了？
刚起步做分子，不是很懂，多多指教了~~
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Thatislife,onlylifehurts.
5楼2012-09-28 22:18:55
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