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yalong

木虫 (小有名气)

[求助] 有没有人遇到过PCR前面扩的很好，之后相同的条件怎么也扩不出来了

有没有人遇到过PCR前面扩的很好，之后相同的反应体系，相同的引物，相同的模版怎么也扩不出来了
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1楼 2012-09-23 16:51:09
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zqx128

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yalong: 金币+1, 谢谢~ 2012-12-04 20:48:47
应该是有条件改变了吧？所以条件绝对不变的话理应都能扩出来的。
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2楼2012-09-23 17:52:01
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yalong

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zqx128 at 2012-09-23 17:52:01
应该是有条件改变了吧？所以条件绝对不变的话理应都能扩出来的。

是没有变啊，可就是扩不出来啊，是mcrA基因的mcrAf和mcrAr引物
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3楼2012-09-23 22:15:41
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yalong: 金币+1, ★有帮助, 谢谢~ 2012-12-04 20:49:01
那就是你的模版时间太久了，换一个模版试一下！
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持之以恒、永不放弃！
4楼2012-09-23 23:05:42
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yalong: 金币+2, ★有帮助, 谢谢~ 2012-12-04 20:49:15
我以前的PCR出现过这样的问题，结果我懒得一个一个去找原因，索性全部换掉，这样最快捷简便
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5楼2012-09-24 09:33:55
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光合小S

铁虫 (初入文坛)
yalong: 回帖置顶 2012-12-04 20:49:24
我也出现过这样的问题，也许是因为条件的原因，我把引物重新稀释了，然后又做了一次就P出来了。建议你再重新做一次，如果其他条件没变，就看看是不是模版和引物的原因。
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6楼2012-09-24 10:00:43
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dajiong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yalong: 金币+6 2012-12-04 20:49:43
模板DNA可能已经降解了。或者酶也有可能污染了。
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哦也
7楼2012-09-25 00:34:34
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-25 14:24:44
1：引物问题，重新稀释一批
2：模板问题
3：酶的问题
相同PCR条件下，不能重复，只能是试剂的问题.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
8楼2012-09-25 08:46:30
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