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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求PET-32a表达载体

最近一直在做基因表达,用的是PET-32a表达载体,可是就是表达不出来?希望各位能够帮我解决一下这个问题,谢谢
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小神龙198901

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先你得确定目的基因是否发生移码,质粒和目的基因是否连接上了,然后看转化是不是假阳性,最后看蛋白是不是形成了包含体,或者是诱导剂的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
加油你能行
2楼2012-09-23 14:55:07
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果楼上说的都没有问题,那就是诱导条件的问题!
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-09-23 23:18:13
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once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题是 你自己知道这个蛋白能在E.Coli 表达吗?因为有很多异源表达是不行的,E。coli也不是万能的。
4楼2012-09-24 15:50:04
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田甜思

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小神龙198901 at 2012-09-23 14:55:07
首先你得确定目的基因是否发生移码,质粒和目的基因是否连接上了,然后看转化是不是假阳性,最后看蛋白是不是形成了包含体,或者是诱导剂的问题

不应该发生移码的呀 我就是直接酶切接进去的呀 目的基因也连上去了的 我怎么鉴定是假阳性 和蛋白是否形成了包含体? 谢谢
5楼2012-09-24 18:16:08
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田甜思

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-23 23:18:13
如果楼上说的都没有问题,那就是诱导条件的问题!

有木有可能是质粒的问题呢?因为我的师兄师姐也木有表达出来,所以很懊恼
6楼2012-09-24 18:17:18
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