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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求PET-32a表达载体

最近一直在做基因表达，用的是PET-32a表达载体，可是就是表达不出来？希望各位能够帮我解决一下这个问题，谢谢
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1楼 2012-09-23 14:47:08
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小神龙198901

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先你得确定目的基因是否发生移码，质粒和目的基因是否连接上了，然后看转化是不是假阳性，最后看蛋白是不是形成了包含体，或者是诱导剂的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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加油你能行
2楼2012-09-23 14:55:07
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果楼上说的都没有问题，那就是诱导条件的问题！
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-09-23 23:18:13
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once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题是 你自己知道这个蛋白能在E.Coli 表达吗？因为有很多异源表达是不行的，E。coli也不是万能的。
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4楼2012-09-24 15:50:04
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小神龙198901 at 2012-09-23 14:55:07
首先你得确定目的基因是否发生移码，质粒和目的基因是否连接上了，然后看转化是不是假阳性，最后看蛋白是不是形成了包含体，或者是诱导剂的问题

不应该发生移码的呀 我就是直接酶切接进去的呀 目的基因也连上去了的 我怎么鉴定是假阳性 和蛋白是否形成了包含体？ 谢谢
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5楼2012-09-24 18:16:08
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-23 23:18:13
如果楼上说的都没有问题，那就是诱导条件的问题！

有木有可能是质粒的问题呢？因为我的师兄师姐也木有表达出来，所以很懊恼
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6楼2012-09-24 18:17:18
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