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雨欣crystal

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问同源重组的缺陷型病毒如何纯化

我用red重组系统敲出了一种杆状病毒基因组上的一个基因,PCR鉴定的过程中发现,重组的Bacmid总是扩增出两条带,一条与成功插入基因大小相符,一条与野生型病毒对照的条带大小一样,请问这是病毒不纯吗?除了划线有没有什么其他的纯化办法?
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fenghan06

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-14 15:30:46
基本上划线应该能够纯化出来

你尝试过将PCR出来的DNA和野生菌的DNA混合, 然后再走电泳吗?

因为有可能是non-specific扩增而已 (我建议你先使用上面的方法看看, 如果不是完全一致大小, 基本上在1.5%-2%的agarose gel上可以看得出分别), 再者, 你可以切胶回收DNA, 并且对两个带里的DNA进行测序
2楼2012-09-14 14:19:22
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