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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pepc基因 进行扩增 退火温度是多少
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cao126

铜虫 (正式写手)

[求助] pepc基因 进行扩增 退火温度是多少

tm为59.4   退火温度应设多少
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1楼 2012-09-14 10:14:51
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cao126: 金币+1 2012-09-14 10:58:27
一般比Tm值低5度左右
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2楼2012-09-14 10:27:30
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cao126: 金币+3, ★有帮助 2012-09-16 09:42:34
一般设定比理论Tm低5℃，但实际上与引物一级结构序列有关，设计不当可造成非特异性扩增，此时应调整温度和相应的时间，一般提高温度会增加扩增的特异性。短时间退火有利于产物的特异性。
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3楼2012-09-14 10:27:55
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cao126: 金币+1, ★有帮助 2012-09-16 09:41:06
理论上是按比Tm值低5度扩增，但是过低特异性不强，你可以设温度梯度，在59.4左右各设两至三个温度。
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持之以恒、永不放弃！
4楼2012-09-14 10:53:14
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