24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2457  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

养活它

新虫 (初入文坛)

[求助] 有谁做过细菌的PCR实验吗?

有谁做过细菌的PCR实验吗?想向各位高手求救一下几个问题:
    现在我做微生物培养(大肠),需要进一步做PCR,我的方法如下:
   开始从冰箱拿到菌源,先进行普通平板活化,然后再挑取疑似菌落进行平板划线,进一步筛选(伊红美兰筛选培养基),然后再进一步做个生化鉴定试验,确定该菌为目的菌。确定目的菌之后,再进行LB培养,测定其OD 600,然后取菌液进行稀释(十个梯度),接着进行倒平板培养、计数(按照国标)。
   1 针对我的方案,麻烦各位专家提点不足之处。
   2 我的方案里面涉及的培养基,有没有不合适的?
   3  方案里的生化试验,从经济、快速、准确来考虑,最好选哪个?
   希望大家多多提出宝贵意见和建议。谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+5, x谢谢热心交流~ :) 2012-09-13 10:34:36
引用回帖:
5楼: Originally posted by 养活它 at 2012-09-10 21:01:25
你好,谢谢您的帮助,不过我有点不太明白您的意思。
   1 斜面活化
   2 筛选 (具体怎么筛选的?比如金葡菌)
   3 鉴定(PCR测序)
   您的意思是这样吗?...

1活化 我会选择液体活化。
2筛选的话,我觉得一次筛选就行,你上面写得是两步
3 就是鉴定,方法很多,感觉阳性率高的话质粒提取,然后大小正确送去测序即可,阳性率不高,可以菌液PCR,高通量,一次可以挑取四五十个
6楼2012-09-10 21:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, good,很热心的虫子 2012-09-10 17:56:41
实验步骤还可以,第一步活化,然后挑取疑似菌落划线,我觉得不太好,后一步已经有选择培养基了,这一步可以在液体中活化6个小时后,然后筛选,鉴定阶段,可以提质粒然后酶切,或者PCR鉴定,或者直接菌液PCR,我用的方法是,挑取菌落,液体培养6个小时,然后按照PCR一般体系扩增,最后送去测序,一切以测序结果为准。省时的话还是直接菌液PCR,然后测序比较好。
2楼2012-09-10 14:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
顶 菌液PCR 测序 挺好的
ControlMyself
3楼2012-09-10 16:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养活它

新虫 (初入文坛)

谢谢你,不过我觉得应该还有些不足,可是不知道那处应该改一下……
4楼2012-09-10 20:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 273求调剂 +4 白居不易. 2026-04-09 6/300 2026-04-14 19:54 by 逆水乘风
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +25 ioodiiij 2026-04-08 25/1250 2026-04-14 15:59 by zs92450
[考研] 297求调剂 +23 ORCHID1 2026-04-10 26/1300 2026-04-14 13:52 by 陈皮皮
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 材料085601调剂 +32 何润采123 2026-04-10 34/1700 2026-04-14 08:47 by 木木mumu~
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +4 双一流本科机械 2026-04-08 4/200 2026-04-14 07:32 by Abskk
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 5/250 2026-04-10 10:22 by Evan_Liu
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
信息提示
请填处理意见